英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
RNA转染（entranster）后沉默现象不明显怎么办？
可能原因： 1. RNA与转染试剂比例不佳。可进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳。 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。 3. RNA效率不高。选择最优RNA，并采用已知高效的RNA做对照。 4. RNA酶污染。建议无RNA酶和内毒素的吸头、离心管和溶液等材料和实验器具。 5. 转染后培养时间不够。在mRNA水平可以到48 小时以后验证结果，在蛋白水 …
阅读更多 »如何利用好慢病毒感染的原理和特点？
一、原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …
阅读更多 »病毒包装过程中，细胞大量死亡，还有必要收集病毒吗
在病毒包装过程中，如果观察到细胞大量死亡，是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素： 病毒滴度：尽管细胞大量死亡，仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高，可以继续收集病毒用于后续实验。 污染：细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染，收集病毒可能不是一个好主意，因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …
阅读更多 »细胞转染实验有哪些方法？
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »细胞转染实验方法有哪些？
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »细胞转染实验的不同方法
1.DEAE-葡聚糖。这是早在1965年出现的转染方法。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子，使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克，也可能是细胞内吞作用使得DNA复合体进入细胞。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染，可重复性好，转染时要除掉血清。 2.磷酸钙共沉淀转染。最早在197 …
阅读更多 »做慢病毒滴度测定实验，请问是所有的都用293t细胞来做，还是说我要在别的细胞上做稳转株，我用别的细胞去摸病毒滴度就可以呀？
核心原则 标准物理滴度测定：强烈推荐使用293T细胞。 功能性滴度测定/特定应用验证：使用你的目标细胞。 详细解释 为什么推荐293T细胞测定物理滴度？ 高易感性： 293T细胞对慢病毒感染非常敏感，因为它们高表达慢病毒进入所需的受体（如LDL受体）。 高转导效率： 它们通常能达到非常高的转导效率（>80%甚至90%+），这使得检测阳性细胞、计算滴度变 …
阅读更多 »慢病毒感染后72小时，效率低，细胞已经长满，有什么办法补救？
在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下，可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件： 细胞传代或重新播种：如果细胞已经长满（汇合度较高），可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代，重新播种在新的培养板上，使其达到较低的汇合度（例如30-50%），然后再进行感染。 优化感染时的MOI（Multiplicity of Infecti …
阅读更多 »如何选择正确的方法进行细胞的支原体检测？
几种支原体检测方法，各有优缺点。各实验室可根据具体情况，选择不同的方法，或几种方法联合使用。 1. 培养法为最为经济可靠的方法，但其实验周期较长，所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。 2. 荧光指示细胞法较为快捷，方法简单，但其灵敏度有一定的欠缺， 易造成漏检。 3. PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少，既可做细胞本身，也可做细胞上清的检测， …
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