细胞生物学

1）优化条件：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸 …

1）实验条件优不佳：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其 …

聚集体培养(aggregate culture) 是指先将肿瘤细胞在旋转摇动培养仪上培养，使肿瘤细胞形成规则的细胞球体结构，然后再将球体进行静止培养，肿瘤细胞可自由从球体向周围移动，观察测量肿瘤细胞向周围移动的情况，记录移出细胞数、细胞移出最远距离等，也可计算肿瘤细胞运动的速度，比较不同肿瘤细胞运动性的差别。 （一）材料与设备 50ml 锥形瓶、旋转摇动培养 …

细胞电转染实验效率低的原因一般有以下几点： 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d …

电穿孔效率受以下几种因素的影响： 外加电场的强度。电压过低，培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过； 电压过高，细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系， 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔， 20% ～ 50％的细胞能够存活（根据台盼蓝拒染法的检测结果） ( Patterson 1979; Baum et al. …

培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。 材料 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1) 含10 ％胎牛血清 的RD 培养基 4X10-5mol/L 氨基喋呤(A 液；用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液） 1X10-5mol/L 次黄嘌呤／ 1. 6 X 10-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷，双蒸水配制( …

下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10 ~ 13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 胚胎的分离 适用哺乳动物（仓鼠、小鼠和大鼠） 采用认可的方案处死啮齿动物 立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。若可能，置紫外灯下照射5分钟 用无齿的摄子和剪子在前腿下作一腹部水平切 …

将siRNA转染入贴壁动物细胞（如哺乳动物细胞系、昆虫细胞系）。 以24孔板siRNA转染为例： (1) 转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，使转染时的细胞密度能够达到30~50％(不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验)，请使用无抗生素的培养基。 注意：转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细 …

由此可见，Entranster-H4000具有更好的转染效果。

与之前文章中介绍的DEAE－葡聚糖方法相反，此替方案采用较低浓度的DEAE－葡聚糖( 250μg/mL) ，与细胞作用的时间较长（达8h) 。尽管不如使用高浓度DEAE－葡聚糖的转染效率高，但低水平的DEAE－葡聚糖细胞毒性小。 试剂 DMEM 培养基 HEPES 缓冲的DMEM 培养基 方法 转染前24h, 通过胰酶消化收集指数生长的细胞，按105 个细胞 …