细胞生物学

带有Lenti序列的质粒通常不能直接转染目标细胞来实现功能，因为这些质粒设计的初衷是通过病毒介导的基因转导。慢病毒系统需要经过病毒包装步骤后才能有效感染并整合到目标细胞的基因组中。 原因： Lenti质粒本身无法感染细胞：Lenti载体质粒中虽然包含有病毒基因组的部分元件，但缺乏构成病毒颗粒所必需的结构蛋白。要将质粒中的基因传递给目标细胞，必须通过包装细胞来 …

如果细胞密度较低，一般来说，细胞在转染前的培养时间是很关键的。48小时的培养时间通常是足够的，但是否适合转染还要考虑几个因素： 1. 细胞的生长状态 细胞在转染时最好处于对数生长期，也就是细胞在活跃分裂和增殖中。若细胞密度过低，可能会处于生长迟缓或衰退状态，这会影响转染效率。 细胞密度太低（<30%）：如果细胞太少，可能会影响转染试剂的吸附和细胞的转染 …

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …

1. 细胞培养： 取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。 2. 细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。 3. 细胞染色： 1500rpm离心5min， …

试剂 运载 DNA l0mg/mL 细胞生长培养基 电穿孔缓冲液 指数生长的培养细胞 线性化或环状质粒DNA ( 1 ~ 5μg/μL , 溶于无菌去离子水） 磷酸盐缓冲液( PBS ) 胰岛素 设备 电穿孔杯 电穿孔仪器 血细胞计数器 组织培养皿或多孔培养板 组织培养瓶（75cm2） 方法 准备电穿孔用细胞。 对于贴壁细胞 电穿孔前一天，通过胰酶消化释放贴 …

是的，藻类细胞和动物细胞电转所用的仪器通常有一些区别。具体来说，电转仪器的选择和设置参数会因细胞类型的不同而有所不同，以下是一些主要的差异： 1. 电转仪器的类型 藻类细胞通常会选择高压短时脉冲电转仪，因为藻类细胞多有细胞壁，且结构较坚硬，需要较高的电压来突破细胞壁，使 DNA 进入细胞。 动物细胞（尤其是哺乳动物细胞）一般选择低压长时脉冲电转仪，因动物细胞 …

流式检测细胞周期操作步骤 1. 细胞培养： 取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。 2. 细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。 3. 细胞染色： 1 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …