细胞生物学

（一）原理 利用电子显微镜的超级放大功能， 直接观察培养细胞中支原体污染情况。 （二）材料与设备 待检测细胞， 0.05％胰蛋白酶／0.02%EDTA 、2.5％的戊二酸、1％饿酸、0.1mol/L磷酸缓冲溶液（ pH7.4 ) ，扫描电镜及相关设备。 （ 三）操作步骤 1. 将待检测细胞传代至贴有盖玻片的培养皿中。2. 37°C , CO2 培养箱中培养2 …

体外培养细胞传代规范的建立 细胞从原代培养时开始，就要建立细胞传代常规，即最好依据严格的时间表进行传代等操作，这样可以保持和监控细胞的增殖行为。若到了适合的时间，细胞还没有达到足够高的密度（即细胞没有彼此汇合），那么应增加接种密度：相反，若细胞很快彼此汇合，则应降低接种密度。理想的细胞浓度是使细胞每3~4d 更换培养液，每7d 传代。常规传代使细胞可重复标准 …

慢病毒感染效率低，尽管用胶体金测试显示滴度很高，可能有以下几个原因： 病毒颗粒质量：虽然胶体金检测显示病毒滴度很高，但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损，无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异：胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量，但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒（感染性单位）可能比实际检测的数量要低 …

microRNA（miRNA）是一种机体内源性表达的单链小分子RNA，位于基因组非编码区，本身不具有开放阅读框（open readingframe，ORF），具有高度保守性，时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中，不编码任何蛋白质，长度仅为20～24nt。成熟的miRNA5′端有一个磷酸基团，3′端为羟基，由具有发夹状结构的约70～90nt的 …

细胞相比转染效率不可重复原因： 1.细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 2.细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 3.细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 4.血清质量不稳定。用同一批号的血清。

细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题，尤其是原代细胞转染，转染难度更大。现分享几个细胞转染实验中易出现的问题，望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …

Lonza 电转仪（如 Lonza 的 Nucleofector 系列）主要设计用于动物细胞和一些较为脆弱的细胞类型，比如哺乳动物细胞、原代细胞、干细胞等。这类电转仪器的主要特点是通过特定的低压和特定波形脉冲，能在不损伤细胞的情况下实现较高的转染效率。因此，Lonza 电转仪并不是专门为藻类细胞设计的，使用时可能会遇到一些问题和限制。 使用 Lonza 电转 …

一、原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …

恶性转化的细胞在许多方面不同于其相应的正常细胞，主要不同在于它们失去了接触抑制生长，获得永生性和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外检测细胞转化和致瘤性的替代方法。 材料 2% (w/ v) 琼脂 基础营养培养基，如DMEM ，含24. 6 ％和20% (v/ v) 胎牛血清 单细胞悬液 12 孔培养板 15ml 聚碳酸酣锥形离心管 ，灭菌 对 …

材料 装在冷冻培养瓶中的细胞： BS-C-1  、CV-1  、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞 70% (VIV) 乙醇 起始和维持培养基（表1) ， 37°C PBS （可选） 胰蛋白酶／EDTA： 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V) EDTA, 37℃ 25 cm2和150 cm2组织培养瓶 湿润的、37°C 、5% …