荧光表达后的细胞可以在冻存后72小时再测荧光,但有几点需要注意: 细胞存活率:冻存和解冻过程可能会影响细胞的存活率和状态。确保细胞在解冻后恢复良好,具有正常的形态和活力。 荧光稳定性:荧光蛋白的稳定性可能会随时间或细胞状态的变化而有所改变。确保荧光信号在解冻后仍然足够强且稳定。 冻存条件:使用适当的冻存保护剂(如DMSO)并在-80°C或液氮中冻存,以尽量减 …
阅读更多 »免疫共沉淀经验总结分享
免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …
阅读更多 »电镜包埋剂应该具备哪些特征?
理想的电镜包埋剂(electron microscopic embedding media) 应具有以下性质:黏度低,易透入,聚合均匀,聚合后体积收缩小,能耐受电子轰击,高温下不变形,对细胞成分提取少,精细结构保存良好,在电镜的高倍放大下,不呈现可见结构,有良好的切割性能,有适当的反差,对人体无害等。但实际上,现在所用的各种包埋剂都各有利弊。 包埋剂的种类很 …
阅读更多 »病毒包装过程中,细胞大量死亡,还有必要收集病毒吗
在病毒包装过程中,如果观察到细胞大量死亡,是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素: 病毒滴度:尽管细胞大量死亡,仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高,可以继续收集病毒用于后续实验。 污染:细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染,收集病毒可能不是一个好主意,因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …
阅读更多 »石蜡切片的操作要点
组织化学中的组织切片主要有石蜡切片法、冰冻切片法和振动切片法等。石蜡切片法比较节省时间,操作容易,可切极薄的组织片(4 μm 以下,通常为6~10μm 厚的切片),能做连续切片,且组织块可包埋在石蜡中永久保存。但石蜡切片只能用于较小的组织块,不适用于大的组织块。石蜡切片法能改变组织内的化学反应,甚至使可显示的酶和其他物质(如脂类)完全丢失,或使蛋白质变性、酶 …
阅读更多 »PI染色与流式细胞术
流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面,用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析,可区别多种细胞的特性,为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。 流式细胞术最大的特点是能在保持 …
阅读更多 »石蜡包埋法如何选择石蜡?
石蜡包埋法是组织学制片中最常用的方法、石蜡(paraffin)是由石油中分离出来的一种甲烷, 系固体碳化氢, 呈蜡样半透明的结晶块状。切片用石蜡应选优质的品种, 要纯而透明, 并有适当黏性。根据熔点的不同,有软蜡和硬蜡之分,软蜡的熔点为52~56°C ,硬蜡为60~62°C 。在室温高时用硬蜡,室温低时用软蜡;薄切片宜用硬蜡, 厚切片宜用软蜡。新蜡内含气体, …
阅读更多 »免疫组化技术大全
一、免疫组织化学简介 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体 …
阅读更多 »慢病毒感染,胶体金测出来很高,可感染效果很差的原因
慢病毒感染效率低,尽管用胶体金测试显示滴度很高,可能有以下几个原因: 病毒颗粒质量:虽然胶体金检测显示病毒滴度很高,但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损,无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异:胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量,但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒(感染性单位)可能比实际检测的数量要低 …
阅读更多 »免疫组化实验结果的判定原则和分析标准
免疫组化实验结果的判定和分析,就实验结果而言,免疫组化技术主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供。 免疫组化结果的判定原则: ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内;EMA应定位在细胞膜上等等。 …
阅读更多 »
英格恩生物技术博客 生物实验干货分享