蛋白和酶

1． Bradford 工作液 95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250，溶解完后再加磷 85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶 考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存（Bradford不稳定，一周内有效） 2． 裂解液 尿素 8M 硫脲 2M CHAPS 4% DTT 60 mM Tris—base 4 …

保存蛋白质最方便的方式是在冰箱中（即4~8℃) 以不冻水溶液的形式保存，对于短期保存或蛋白质特别稳定，这是最有效的方法；然而，必须要认识到即使蛋白质不聚集，也会有渐进的化学降解（特别是氧化）。 在溶液条件（优化了天然状态的热力学稳定性）下，聚集能够被最小化，因为蛋白质总体已脱离了部分折叠、能够聚集的种类(Kim et al. 2000) 。例如，大多数蛋白质 …

1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位，因为 …

既然目标蛋白的半衰期是30小时，说明它在细胞中相对稳定，也就是说，蛋白不会很快降解。 在使用siRNA干扰该蛋白的表达时，有几个关键时间点需要考虑： 一般siRNA作用流程： 转染后6–12小时：siRNA开始被细胞利用，mRNA水平开始下降。 24–48小时：mRNA水平通常显著降低（具体情况因靶基因和细胞类型而异）。 48–72小时：蛋白水平逐步下降，尤 …

精神分裂症是一种使人衰弱的精神障碍，影响着世界上大约1%的人口，但人们对这种疾病并不是十分了解。精神分裂症的遗传学是非常异质的，因此很难确定可能导致这种疾病的具体改变。然而，越来越多来自人类研究的证据表明，14-3-3家族的改变与精神分裂症之间存在联系。 2022年3月14日，发表于Frontuers in Molecular Neuroscience 的一 …

跑过琼脂糖凝胶电泳的小伙伴，是不是经常遇到过电泳拖尾的现象啊？相信不少人点头如捣蒜了。提个质粒拖尾，提个DNA拖尾，连PCR也拖尾，拖尾什么的最常见了。验证也就算了，关键是图片拍出来不好看了，发文章什么的太影响档次了。下面我就跟据自己的经验跟大家讲讲琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾，有不足的希望大家多多评论补足啊（三人行必有我师嘛）！！ 那琼脂糖凝胶电泳为什么会拖 …

去除去污剂的可行性（根据Harlow 和Lane 1988) 离子型去污剂 用分子筛G25 柱子进行凝胶过滤，对于一些蛋白质来说，用低于临界微团浓度的另一种去污剂来平衡柱子。 加入8 mol/L 的尿素， 然后把去污剂加到离子交换柱上，让蛋白质在8 mol/L 的尿素中流动，再透析去除尿素。 对于离子型的去污剂，有一个相对较低的微粒大小和较高的临界微团浓度， …

可通过以下几个方面进行改进： 1. 可减少蛋白上样量； 2. 降低一抗二抗稀释度，减少抗体孵育时间； 3. 如果背景深的话，则要把发光液沥干些再压片；如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液，比如Enlight。

  如果在乙醇沉淀后，核酸中还残留乙醇，就很难用水或缓冲液溶解沉淀。如果你急用或者需要去除大体积的挥发性液体，可以使用真空浓缩设备。真空浓缩设备由离心机、真空泵、加热器和冷凝装置组成，其组合模式多种多样，相关的实验室使用规则变化更多。 一、步骤 使用真空浓缩设备前至少30min 打开冷凝装置。在有些装置中，可能需要加入干冰。 打开真空泵。 开通风管以释放离心 …