过敏性疾病是一个持续存在的临床挑战,治疗选择有限。因此,找到一种治疗过敏原的方法、改善过敏性疾病的技术尤为重要。 2022年1月17日,美国INDOOR生物技术公司的研究团队在《Frontiersin Allergy》杂志上发表了一篇题为 New Frontiers: Precise Editing ofAllergen Genes Using CRISPR …
阅读更多 »在哺乳动物细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA 功能
向哺乳动物细胞内转染反义寡核苷酸从而抑制miRNA 功能的具体方法参照本方案。通过检测miRNA 靶蛋白水平或携带miRNA 靶基因的3’端非翻译区( 3UTR ) 报道基因的活性来检测ASO 对于miRNA 的效应。本方案主要针对24 孔板设计,如果用其他多孔板、细胞瓶或不同直径培养皿培养细胞,需根据孔/瓶表面积计算细胞密度和试剂体积 试剂 A …
阅读更多 »应用siRNA 抑制特定基因的活性
长链dsRNA 的导入能够在小鼠卵母细胞、早期胚胎、胚胎干细胞和胚胎癌细胞( Svoboda et al. 2000; Wianny and Zemicka-Goetz 2000; Billy et al. 2001; Yang et al. 2001),以及植物、蠕虫、果蝇体内诱导特定和高效的RNA 干扰。但是,早期在哺乳动物体细胞中用长链dsRNA 诱导 …
阅读更多 »DNA 序列测定——双脱氧( Sanger ) 测序法
双脱氧法或酶法利用DNA 聚合酶合成单链DNA 模板的互补拷贝,这一方法最先由F. Sanger 及其合作者发展而来。DNA 聚合酶不能起始DNA 链的合成,而是在复性于“模板“DNA 的引物的3 ‘端上进行链的延伸(图1) 。链的延伸是在引物生长端的3′ 羟基掺入脱氧核糖核苷酸。双脱氧测序法利用了DNA 聚合酶能以2′, …
阅读更多 »寡聚(dT)-纤维素柱层析法分离纯化mRNA
【试剂与器材】 (一)试剂 1. 0.1mol/L NaOH ,每组200mL 2. 寡聚Oligo(dT)-纤维素 3. 加样/洗涤缓冲液1:0.5 mol/L NaCl, 20 m mol/L Tris-HCl(pH 7.6),每组250mL 或0.5mol/L NaCl, 20mmol/L Tris-HCl(pH7.6), 1mmol/L EDTA(p …
阅读更多 »DNA分离前你应该知道的那些事
DNA 是相当稳定的。这也是保存和传递遗传信息所必须具备的但是不能因此而太随意,DNA的污染来源主要是其他DNA 。 DNA 分离 分离的DNA可以是基因组的也可以是染色体组外的。 研究DNA 分离试剂盒,这些试剂盒可以是针对基因组的和染色体组外的DNA、从琼脂糖凝胶中分离DNA或者从PCR产物中抽提DNA。他们利用一些结合DNA的树脂或者滤膜,通常是一些小 …
阅读更多 »PCR实验步骤及常见问题汇总
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。 一、 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) PCR由变性–退火–延伸三个基本反应步骤构成: ① …
阅读更多 »异丙醇法沉淀DNA
DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇,异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的DNA 时,异丙醇是比较好的选择。在室温用异丙醇沉淀减少了一些蔗糖或者氯化钠和DNA 发生共沉淀的现象。但异丙醇还是有一些不足之处: 盐在35 %的异丙醇溶液中比在65 %的乙醇溶液中难溶。 DNA 沉 …
阅读更多 »师姐真传的一些引物设计技巧(师姐比师兄靠谱)
实验室小白遇上引物设计,一片迷茫,不知所措。 师姐:现在常用的的引物设计软件有Oligo、PrimerPremier、DNA man等等,还有在线引物设计软件。咱实验室的软件给你拿去。 (师姐比师兄靠谱,真的是手把手的教了,边操作边讲解。) 1. 在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中 …
阅读更多 »昼夜节律转录因子BMAL1在生殖内分泌学和生育中的关键作用
脑和肌肉芳烃受体核转位蛋白1(BMAL1)是昼夜节律振荡的核心成分,参与了许多生理活动。越来越多的证据表明BMAL1在生殖生理学中发挥着重要作用。 2022年3月2日,Yin Jiang 等人在Front Endo-crinol(Lausanne)上发表了一篇题为Critical Roles of the Circadian Transcription Fa …
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享