2024年 5月 23日, 星期四
新闻

核酸基因

抑制miRNA 功能的反义寡核苷酸制备

本方案用于设计特异性抑制细胞内miRNA 功能的反义寡核昔酸(ASO ) 。2′-O- 甲基化修饰的反义寡核苷酸( ASO ) 可以增加其有效性和抗降解能力, 然而3’端胆固醇修饰可以促进ASO 进入细胞内。 设备 连接互联网的计算机 方法 1 从miRBase ( http://rnicroma.sanger.ac. uk/sequences …

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PCR (多聚酶链式反应)

PCR 是1985 年由Kary Mulis 在Cetus 公司发明的,是一种体外复制和扩增DNA的方法。 DNA模板首先在高温下变性,当温度降低时,DNA 两侧的寡核苷酸引物与互补序列结合,在DNA聚合酶作用下,随着温度的缓慢提升,引物逐渐延伸,两条引物之间的区域被合成。然后DNA再次变性,引物再次结合,DNA的合成再次进行,这样周而复始,重复20  …

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采用dsRNA 浸泡果蝇S2 细胞进行RNA 干扰

该方案是一种通过用含有dsRNA 的培养液浸泡果蝇S2 细胞来诱导RNA 干扰的简便方法。与转染方法相比,浸泡操作需要的步骤更少,因此可用于高通量的RNA 干扰筛选。而且, 浸泡避免了转染试剂可能带来的毒性,但是,通过浸泡向果蝇S2 细胞转运dsRNA 的效率与转染方法相比较低。对于通过浸泡dsRNA 难以抑制其表达的基因,可以通过多次转染dsRNA 获得抑 …

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DNA的乙醇沉淀

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的,而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。 一、步骤 于最多体积450 μl 的DNA 样品中,加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇,充分混匀。 样品踩于冷环境中沉淀:-20℃ 过夜,或-70℃30 min, 或干冰中5 min 。 使用干冰进行乙醇沉淀 …

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如何制备双链siRNA?

本方案介绍如何将合成的siRNA 有义链和反义链复性形成双链siRNA, 以及利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对双链siRNA 进行分析。 试剂 丙烯酰胺: 双丙烯酰胺(19 : 1, 40%, m/V)过硫酸铵( 10%, m/V) 复性缓冲液(10 X ) 2‘ 脱保护缓冲液[100 mmol/L 乙酸,用四甲基乙二胺( TEMED) 调整pH …

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DNA 凝胶电泳注意事项

DNA胶用来分离、确定或者纯化DNA片段。用于DNA测序反应的测序胶不在这儿讨论。每位实验室成员有不同的制胶方法。 样品准备 6 X 上样缓冲液: 30% (V/V) 甘油, 0.25%(W/V) 溴酚蓝, 0.25% (W/V) 二甲苯腈蓝,蒸馏水配制。贮于-20’C 。 样品缓冲液与DNA在60’C 温育5 分钟。 标准分子/分子 …

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RNAi、miRNA及siRNA的区别和联系

RNA干扰 (RNAi):近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。 MicroRNA(miRNA,微RNA): …

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实验室最常用的移液枪你用对了吗?

移液枪对我们医药生物研究人员来说是最熟悉不过了。可是,你真正了解它吗?你的使用方式是正确的吗?相信不少人听到这个问题后,已经开始回想自己平时的操作,也有一部分人在认真考虑答案了吧。细节决定成败,今天在这里跟大家普及一下移液枪的使用规程,希望对大家以后的实验有帮助。 一、移液枪的使用规程 1. 移液枪的放置 移液枪要放在支架上 2. 样品准备 要求液体温度与吸 …

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2022的七大热点技术: 靶向基因治疗、空间多组学……

1.完全基因组 在去年5月发表的预印本中,人类共有基因组序列 GRCh38 添加了近 2 亿个新碱基对,并撰写了人类基因组的最后一章。 GRCh38 于 2013 年首次发布,一直是一个有价值的工具,但也存在漏洞。主要是因为测序技术产生的读数准确但较短。它们的长度不足以明确地绘制出高度重复的基因组序列,包括覆盖染色体末端的端粒和在细胞分裂过程中协调新复制的 …

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