2022年 5月 17日, 星期二
新闻

核酸基因

染色质免疫共沉淀(ChIP)实验原理

染色质免疫共沉淀可以:(1)组蛋白修饰酶的抗体作为“生物标记”;(2)转录调控分析;(3)药物开发研究;(4)DNA损失与凋亡分析。 实验方法原理: 在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。 IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球 …

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反转录定量PCR 分析小RNA

Northern 杂交可以揭示小RNA 的表达水平,同时也可揭示小RNA 的长度,并且是小RNA 验证和定量的标准。然而, Northern 杂交不能用来检测低丰度小RNA, 也不能检测大量的小RNA 种类。相比之下,定量RT-PCR 更加敏感并且可以适用于高通量处理(图1) 。 图1 小RNA 定量RT-PCR 分析流程图。 试剂 mirVana miRN …

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SDS 碱裂解法制备质粒DNA: 大量制备

近些年来,随着PCR 技术的出现,以及DNA 克隆和测序方法的发展,对大量质粒载体和重组子的需求也大大减少。因此,本方案曾一度广泛应用,但已经被更为快速和简便的柱纯化方法代替。在本方案中,通过碱裂解法的放大( Bimboim and Doly 1979 ) ,质粒DNA 可从清亮的细菌裂解物中通过含有溴化乙锭的CsCl 梯度离心来进行纯化。 无论是高拷贝数的 …

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RNA的种类

dsRNAdsRNA 即双链RNA , 是由两条互补链复性形成的RNA 分子,可以被Dicer 酶切割形成siRNA 。 Endo-siRNAEndo-siRNA 即内源性小干扰RNA (siRNA) ,是一类存在于几乎所有真核生物中的小干扰RNA 分子。 exo-siRNAexo-siRNA 即外源性小干扰RNA (siRNA) ,是指通过体内或者体外技术 …

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RNA沉淀方法

乙醇沉淀RNA通常RNA 可以像DNA 一样沉淀。步骤1. 加入1/10 体积1 mol/L 的NaOAc (pH4. 8) 和2.5 倍体积冷的95 %的乙醇。2.-20 ℃ 下沉淀过夜。3. 用70 %的乙醇洗涤沉淀。注意:当你处理少量RNA 的时候(低于5 μg) ,在RNA 沉淀之前加入一些载体或者共沉淀物,这类物质将帮助沉淀RNA, 更容易看见沉淀 …

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PCR、RT-PCR、qRT-PCR实验精髓

PCR PCR是很多科研者进入实验室做的第一个分子实验,名字听起来很高级,其实操作起来流程还是比较清晰明了,容易上手。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,用于放大特定的DNA片段,也可看作生物体外的特殊DNA复制。其中使用的Taq酶是1976年从温泉中的细菌分离出来的。它的特性在于能耐高温,是一个很理想的酶。PC …

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siRNA表达载体的构建

siRNA表达载体构建可以:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)应用于基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)用于药物靶点筛选、疾病治疗。 实验方法原理: 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short hairpinRNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启 …

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电穿孔和电融合技术原理及流程

[实验原理] 当细胞置于非常高的电场中,细胞膜就变得具有通透性,能让外界的分子扩散进细胞内,这一现象称为电穿孔。运用这一技术,许多物质,包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法,电穿孔已被广泛用于各种细胞类型,包括细菌、酵母、植物和动物细胞;而且,它还能作为注射方法(称为电注射),把各种外源物质引入活细胞。与其他常用 …

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真空浓缩仪的使用方法

  如果在乙醇沉淀后,核酸中还残留乙醇,就很难用水或缓冲液溶解沉淀。如果你急用或者需要去除大体积的挥发性液体,可以使用真空浓缩设备。真空浓缩设备由离心机、真空泵、加热器和冷凝装置组成,其组合模式多种多样,相关的实验室使用规则变化更多。 一、步骤 使用真空浓缩设备前至少30min 打开冷凝装置。在有些装置中,可能需要加入干冰。 打开真空泵。 开通风管以释放离心 …

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如何将胶内物质转移到膜上?

凝胶是厚而易碎的基质,这使得操作与温浴都很困难。如果要对胶内的内容物进行杂交,必须将内容物从凝胶引导到硝酸纤维素膜或者尼龙膜上。这一过程称为转移。 转移之后,滤膜与一个探针温浴,观察探针是否能与滤膜上的分子杂交。探针由放射性元素或者其他指示剂标记,所以可以被检测。滤膜与探针的杂交称为印迹。 第一次使用印迹技术是由Southern 描述的, 因此, 这种印迹被 …

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