2022年 12月 9日, 星期五
新闻

核酸基因

抑制miRNA 功能的反义寡核苷酸制备

本方案用于设计特异性抑制细胞内miRNA 功能的反义寡核昔酸(ASO ) 。2′-O- 甲基化修饰的反义寡核苷酸( ASO ) 可以增加其有效性和抗降解能力, 然而3’端胆固醇修饰可以促进ASO 进入细胞内。 设备 连接互联网的计算机 方法 1 从miRBase ( http://rnicroma.sanger.ac. uk/sequences …

阅读更多 »

如何制备双链siRNA?

本方案介绍如何将合成的siRNA 有义链和反义链复性形成双链siRNA, 以及利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对双链siRNA 进行分析。 试剂 丙烯酰胺: 双丙烯酰胺(19 : 1, 40%, m/V)过硫酸铵( 10%, m/V) 复性缓冲液(10 X ) 2‘ 脱保护缓冲液[100 mmol/L 乙酸,用四甲基乙二胺( TEMED) 调整pH …

阅读更多 »

PCR实验最常见的9个问题及解决方案

1. 如何有效设计引物 (1)使用Oligo或Primer设计引物,在保守区内设计,长度一般在18-27bp,上下游引物Tm值最好是60-75℃,GC含量=40%-60%,引物自身及引物之间不应存在互补序列,避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的 …

阅读更多 »

DNA分离前你应该知道的那些事

DNA 是相当稳定的。这也是保存和传递遗传信息所必须具备的但是不能因此而太随意,DNA的污染来源主要是其他DNA 。 DNA 分离 分离的DNA可以是基因组的也可以是染色体组外的。 研究DNA 分离试剂盒,这些试剂盒可以是针对基因组的和染色体组外的DNA、从琼脂糖凝胶中分离DNA或者从PCR产物中抽提DNA。他们利用一些结合DNA的树脂或者滤膜,通常是一些小 …

阅读更多 »

佛手柑素(BM)或可被开发成预防骨质疏松症的食品成分或补充剂

骨质疏松症是最常见的骨骼疾病之一,严重影响老年人的健康和生活质量。成骨细胞分化和骨形成的减少导致骨量和微结构的变化,使骨骼容易发生骨折。佛手柑素(BM)是一种来自各种柑橘类水果的天然化合物,具有多种生物活性,包括抗脂肪生成的功能 2022年1月30日,发表于Food &Function的一篇题为Bergamottin promotes osteobl …

阅读更多 »

师姐真传的一些引物设计技巧(师姐比师兄靠谱)

实验室小白遇上引物设计,一片迷茫,不知所措。 师姐:现在常用的的引物设计软件有Oligo、PrimerPremier、DNA man等等,还有在线引物设计软件。咱实验室的软件给你拿去。 (师姐比师兄靠谱,真的是手把手的教了,边操作边讲解。) 1.    在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中 …

阅读更多 »

siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA间的区别

RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来,这方面的科学论文及报道爆炸性增长,几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中,出现了很多与RNA干扰相关的概念,意思很相 近但并不完全相同,这里列举 …

阅读更多 »

碱-SDS 质粒小量制备

小量制备可以从细菌培养物中抽提和分析,离心机12 或16 管足够一次制备。 一、材料 5 ml 过夜培养细菌培养物。使用LB培养基加入合适的抗生素培养单克隆菌体,37’C 振荡培养 灭菌的微桩离心管 冰 溶液I (裂解缓冲液, 25 mmol/L Tr的HCI pH8.0, 50 mmol/L葡萄糖, 10 mmol/LEDTA) ,冰上预冷 溶 …

阅读更多 »

怎样做好荧光原位杂交实验(FISH)?

实验方法及步骤 探针变性 将探针在75℃恒温水浴中温育5 min,立即置0℃,5~10 min,使双链DNA探针变性。 标本变性 将制备好的染色体玻片标本于50℃培养箱中烤片2~3 h。(经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片)。 取出玻片标本,将其浸在70~75℃的体积分数70% 甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2~3 min。 立即按顺序将 …

阅读更多 »

应用长链dsRNA 抑制基因表达

在植物以及大多数真菌、非哺乳动物及其细胞系中,应用外源性长链dsRNA或者表达长反向重复RNA 转录物能够诱发细胞内相应mRNA 的降解(Fire et al 1998; Kennerdell and Carthew 1998; Misquitta and Paterson 1999) 。哺乳动物卵母细胞和dsRNA 诱导干扰素反应缺失的哺乳动物细胞系中,长 …

阅读更多 »