质粒DNA提取的方法很多,有碱变性法、羟基磷灰石柱层析法、溴化乙锭 – 氯化铯梯度超离心法等。本次实验是一种小量快速提取法。小量快速提取法也有多种,但基本原理和步骤是一致的.包括以下步骤:(1)裂解菌体细胞;(2)质粒和染色体DNA的分离;(3)除去蛋白质。RNA及其他影响限制性酶活性的细胞成分;(4)除去提取过程中使用的去垢剂、盐等。 一、原理 …
阅读更多 »慢病毒感染后72小时,效率低,细胞已经长满,有什么办法补救?
在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下,可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件: 细胞传代或重新播种:如果细胞已经长满(汇合度较高),可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代,重新播种在新的培养板上,使其达到较低的汇合度(例如30-50%),然后再进行感染。 优化感染时的MOI(Multiplicity of Infecti …
阅读更多 »早期游泳对Shank3基因敲除的自闭症大鼠模型的行为和纹状体转录组的影响
自闭症谱系障碍(ASD)是一种发育障碍,其特点是在儿童期有社会行为缺陷和刻板行为,至今仍缺乏令人满意的医疗干预。早期游泳干预是一种非侵入性的方法,结合了丰富的环境和运动,已被证明可以改善幼儿的大脑发育和治疗神经发育疾病。 2022年3月31日,Yunchen Meng等人在 Neuropsychiatr Disease and Treatment上在线发表题 …
阅读更多 »PCR扩增产物出现杂带怎么办?
可能的原因和对应的解决方案如下: 1.引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 2.循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。 3.酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。 4.退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 度为梯度设计梯度 PCR …
阅读更多 »无菌操作的注意事项及常见问题
做不同的实验,操作上会有小小的不同,而且不可能每个动作都被描述,所以实验时必须注意自己的动作。通常要注意的就是每项操作时都要尽可能减少污染的可能性,所以动作要尽量减少。 距离,尽量将所需要的物品放在离手最近的地方。距离越近,移动就越少。 暴露,在空气中移动物品的时间越长,接触空气中微粒的概率则越大。试剂瓶敞口在空气中的时间越长,掉落进去的空气中的微粒越多。灼 …
阅读更多 »慢病毒感染后,未能实现相关敲降的原因是什么?
慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释: 慢病毒包装质量问题: 病毒滴度较低,导致感染效率不高,可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体,影响敲降效果。 靶向序列设计问题: shRNA或sgRNA设计不合理,没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应,影响敲降效果。 感染条件不佳 …
阅读更多 »体外转录法制备dsRNA中,怎么知道mRNA的靶区域在哪
在体外转录法制备dsRNA(双链RNA)的过程中,确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤,以帮助确定mRNA的靶区域: 1. 目标基因的选择 首先,确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息(通常从基因数据库中获得,如NCBI)。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA(siRNA)或小发夹RNA(s …
阅读更多 »什么是反向PCR?
1、原理 反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物将含有两引物外未知序列,从而对未知序进行分析研究. 2、目 …
阅读更多 »启动子甲基化调控的miR-148a-3p通过靶向MAP3K9抑制肺腺癌的进展
非小细胞肺癌(NSCLC)占各种肺癌的85%。肺腺癌(LUAD)是NSCLC的主要亚型,其特点是高转移和高死亡率。NSCLC患者的低生存率主要是由于远处转移,占癌症相关死亡的90%。尽管许多治疗策略已经得到应用,但NSCLC的预后仍令人不太满意。缺乏适当的生物标志物和准确的治疗目标以及化疗药物的毒性导致了肺癌的疗效不佳。因此,探索LUAD发生和发展的分子机制 …
阅读更多 »聚丙烯酰胺凝胶的配制
表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml) 溶液成分 5 10 15 20 25 30 40 50 6% 水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 1.5 mol/L Tris (pH …
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