核酸基因

一、 PCR反应体系的组成 1.PCR扩增缓冲液： 50mM     KCl10mM    Tris HCl( pH8.0)1.5mM   MgCl2 2.寡核苷酸引物：是按已知待扩增的DNA 片段序列进行设计，用 DNA合成仪合成。引物序列应位于DNA片段的保守区，两条引物间应注意不要有 …

siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起，常见的因素包括： siRNA设计不合理： siRNA的靶点选择不佳，未能有效靶向目标基因的mRNA，导致抑制效果差或反而激活了基因表达。可以尝试设计不同的siRNA靶点或使用更为优化的siRNA工具进行设计。 转染效率问题： 低转染效率可能导致siRNA无法进入足够多的细胞，从而未能有效抑制目标基因。 …

转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。 缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后 …

分子生物学常用贮存液的配制 1．30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】将29g 丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH 值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称 …

骨质疏松症是最常见的骨骼疾病之一，严重影响老年人的健康和生活质量。成骨细胞分化和骨形成的减少导致骨量和微结构的变化，使骨骼容易发生骨折。佛手柑素（BM）是一种来自各种柑橘类水果的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗脂肪生成的功能 2022年1月30日，发表于Food &Function的一篇题为Bergamottin promotes osteobl …

1. 首先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。 2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 3. 为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 4. 使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 5. 若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 6. 设计引物时，避免在引物3’端含有 …

一、探针的标记 如下设置探针标记的反应体系： （1）待标记探针 (1.75 pmol/μl) ：2μl （2）T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) ：1μl （3）Nuclease-Free Water ：5μl （4）[γ-32P]ATP(3 000 Ci/mmol at 10 mCi/ml) ：1μl （5）T4 P …

核心原则 标准物理滴度测定：强烈推荐使用293T细胞。 功能性滴度测定/特定应用验证：使用你的目标细胞。 详细解释 为什么推荐293T细胞测定物理滴度？ 高易感性： 293T细胞对慢病毒感染非常敏感，因为它们高表达慢病毒进入所需的受体（如LDL受体）。 高转导效率： 它们通常能达到非常高的转导效率（>80%甚至90%+），这使得检测阳性细胞、计算滴度变 …

一、原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的 …

mRNA 在细胞总RNA 中占较小的比例，大量的是核糖体RNA。真核生物的mRNA分离方法利用了大多数mRNA 存在多聚腺苷酸尾巴（有一些mRNA 没有多聚腺苷酸的尾巴）。Poly(A) RNA 可以结合在有多聚寡核苷酸(dT) 的树脂上，在高盐的条件下寡聚胸苷酸－纤维素可以结合PolgA-mRNA, 在低盐的情况下洗脱。这种方法可以批量或者在一个小柱子上操 …