DNA 是相当稳定的。这也是保存和传递遗传信息所必须具备的但是不能因此而太随意,DNA的污染来源主要是其他DNA 。 DNA 分离 分离的DNA可以是基因组的也可以是染色体组外的。 研究DNA 分离试剂盒,这些试剂盒可以是针对基因组的和染色体组外的DNA、从琼脂糖凝胶中分离DNA或者从PCR产物中抽提DNA。他们利用一些结合DNA的树脂或者滤膜,通常是一些小 …
阅读更多 »早期游泳对Shank3基因敲除的自闭症大鼠模型的行为和纹状体转录组的影响
自闭症谱系障碍(ASD)是一种发育障碍,其特点是在儿童期有社会行为缺陷和刻板行为,至今仍缺乏令人满意的医疗干预。早期游泳干预是一种非侵入性的方法,结合了丰富的环境和运动,已被证明可以改善幼儿的大脑发育和治疗神经发育疾病。 2022年3月31日,Yunchen Meng等人在 Neuropsychiatr Disease and Treatment上在线发表题 …
阅读更多 »cDNA文库构建详细步骤
cDNA文库的构建分为六个阶段: 阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链 1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成: poly(A)+RNA (1μg/μl) 10μl 寡核苷酸引物(1μg/μl) 1μl 1mol/L Tris-HCl (pH8.0, 37℃) 2.5μl 1mol/L KCl 3.5μl …
阅读更多 »荧光原位杂交会用到哪些试剂?
一、实验材料、试剂、仪器耗材: 人的MyoD1(MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、暗盒等 二、相关溶液的配制 (1)20×SSC:175.3 g NaCl,88.2 g柠檬酸钠,加水至1 00 …
阅读更多 »UHRF1如何调控AMPK的活性?在细胞代谢中又有哪些关键作用?
AMPK是细胞极为重要的能量感受器,当细胞处于能量匮乏的状态时AMPK会被激活,AMPK激活后可以磷酸化不同的下游底物从而促进分解代谢和抑制合成代谢,最终使细胞达到能量平衡状态。 UHRF1是至关重要的DNA甲基化调控因子,它参与DNA维持甲基化过程的功能已经研究的比较清楚。另外,还有研究表明UHRF1参与DNA的损伤修复。但除此之外,UHRF1是否能直接 …
阅读更多 »寡聚(dT)-纤维素柱层析法分离纯化mRNA
【试剂与器材】 (一)试剂 1. 0.1mol/L NaOH ,每组200mL 2. 寡聚Oligo(dT)-纤维素 3. 加样/洗涤缓冲液1:0.5 mol/L NaCl, 20 m mol/L Tris-HCl(pH 7.6),每组250mL 或0.5mol/L NaCl, 20mmol/L Tris-HCl(pH7.6), 1mmol/L EDTA(p …
阅读更多 »碱-SDS 质粒小量制备
小量制备可以从细菌培养物中抽提和分析,离心机12 或16 管足够一次制备。 一、材料 5 ml 过夜培养细菌培养物。使用LB培养基加入合适的抗生素培养单克隆菌体,37’C 振荡培养 灭菌的微桩离心管 冰 溶液I (裂解缓冲液, 25 mmol/L Tr的HCI pH8.0, 50 mmol/L葡萄糖, 10 mmol/LEDTA) ,冰上预冷 溶 …
阅读更多 »如何制备双链siRNA?
本方案介绍如何将合成的siRNA 有义链和反义链复性形成双链siRNA, 以及利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对双链siRNA 进行分析。 试剂 丙烯酰胺: 双丙烯酰胺(19 : 1, 40%, m/V)过硫酸铵( 10%, m/V) 复性缓冲液(10 X ) 2‘ 脱保护缓冲液[100 mmol/L 乙酸,用四甲基乙二胺( TEMED) 调整pH …
阅读更多 »在果蝇S2细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA 功能
本方案描述了将ASO 转入果蝇S2 细胞以便抑制miRNA 功能的方法。通过检测miRNA靶蛋白水平或miRNA 靶基因3UTR 报道基因的活性,可以检测ASO 对miRNA 的效应。本方案是针对24 孔板设计的,若用其他多孔板、培养瓶或不同直径培养皿,应根据其表面积计算细胞密度和试剂体积 。 试剂 ASO ( 12.5μmol/L ) 和错配和/或无关对照 …
阅读更多 »PCR 标记DNA
PCR 是通过热稳定酶,在模板、dNTPs 和一组与片段3′ 序列互补的引物存在下,对插入物进行次序扩增(Saiki et al. 1988) 。PCR 技术提供的另一优势是在对插入片段的扩增中掺入修正的核苷酸,因此可以生产出不含载体的标记的探针,这排除了在其他方法如缺口翻译所导致的对载体序列的非特异性标记。 目前已有掺入生物素化核苷酸的方法(L …
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