1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »RNA转染与丹参酮IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用研究
丹参酮 IIA(Tanshinone IIA,Tan IIA)是一种从丹参干根中提取的生物活性物质,具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。然而,Tan IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用机制仍有待进一步阐明。现分享一篇运用RNA转染(Entranster)的方法的文献,通过阐明Tan IIA在p53基因缺陷的H1299细胞中的抗肿瘤作用机制,以确定丹参酮IIA …
阅读更多 »RNA转染与人鼻病毒1B基因敲除和干扰素应答的再激活研究
人鼻病毒(HRV)是属于Picornaviridae家族肠道病毒属的单链正义RNA病毒。它在20世纪50年代首次被发现。将近60年后,已经鉴定出超过100种血清型/基因型病毒。HRVs(HV-A,-B,-C)是所有年龄组,尤其是儿童中呼吸道感染最常见的原因,但尚未开发出有效的治疗HVS的药物。现分享一篇RN …
阅读更多 »两个shRNA在转录水平和蛋白水平都有效抑制了基因表达,但是表型做出来却不一致,是为什么?
这种情况可能是由多种因素引起的,以下是一些可能的原因: 转录水平和蛋白水平的不同调控机制:虽然shRNA能够有效地降低目标基因的mRNA和蛋白表达,但有时候蛋白质的功能并不完全依赖于其表达量。有可能是基因表达抑制后,细胞通过一些补偿机制(比如其他途径的上调或活化)来恢复其功能,导致表型不一致。 shRNA的特异性和脱靶效应:shRNA可能会靶向与目标基因相似 …
阅读更多 »RNA转染与MDSC细胞和原发性干燥综合征研究
原发性干燥综合征(PSS)是一种全身性自身免疫性疾病。以外分泌腺的淋巴细胞浸润为特征的,主要是唾液腺和泪腺,导致分泌功能的丧失。虽然PSS的病因仍不清楚,但许多研究已经证实树突状细胞(DCS)、NK细胞、B细胞和T细胞参与了SS的发病机制。最近的研究发现,Th1和Th17免疫应答在PSS的发展中起着关键性的作用。髓系来源的抑制性细胞(MDSC)是具有免疫抑制 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与肠黏膜屏障的信号转导和细菌移位研究
肠上皮表面由一层柱状上皮细胞构成,形成一个与大多数管腔内细菌直接接触的屏障,在防止细菌易位中起着重要作用。肠上皮屏障功能在炎症性肠病(IBD)的发病机制中起着至关重要的作用,但其机制尚未完全阐明。现分享一篇RNA转染(Entranster)与肠黏膜屏障的信号转导和细菌移位研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与非霍奇金淋巴瘤细胞敏感性研究
非霍奇金淋巴瘤(NHL)是具有很强异质性的一组独立疾病的总称。依据细胞来源将其分为三种基本类型:B细胞、T细胞和NK/T细胞NHL。临床大多数NHL为B细胞型,占总数70%~85%。NHL对放疗敏感。越来越多的证据表明mirRNA在调节细胞放射敏感性中起重要作用。现上传一篇运用RNA转染试剂Entranster-R4000转染mir-148b在 …
阅读更多 »RNA转染与利拉鲁肽和MC3T3-E1细胞凋亡研究
近年来,对肠促胰岛素和骨的关系的兴趣不断增加。之前的研究已经表明胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂对骨骼代谢具有有益的合成代谢作用,如通过肠-骨轴促进成骨细胞的增殖和分化。然而,对于GLP-1对成骨细胞凋亡的影响及其相关机制并不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与利拉鲁肽和MC3T3-E1细胞凋亡研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与二氢杨梅素抑制NLRP3炎性体依赖的细胞焦亡研究
越来越多的证据表明,细胞焦亡和炎性细胞程序性死亡与动脉粥样硬化有关;然而,其潜在的机制仍有待澄清。二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM),一种天然的黄酮类化合物,据报道有抗氧化和抗炎的生物活性。然而,DHM对于动脉粥样硬化相关细胞焦亡的影响尚不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与二氢杨梅素抑制 NLRP3炎性体依赖的细胞焦亡研 …
阅读更多 »siRNA转染后目标基因不降反升的原因
一、生物学与分子机制相关原因 1️⃣ 负反馈调控 (feedback regulation) 某些基因被抑制后,会触发细胞的代偿机制。 例如,目标基因下调后,上游转录因子或信号通路被激活,从而 反向上调目标基因 的转录。 特别常见于信号通路核心分子(如 MAPK、PI3K、NF-κB、p53 等)的 knockdown 实验。 建 …
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