英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期 …
阅读更多 »siRNA转染（entranster）与成纤维细胞瘤细胞（l929-a）研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是。现分享一篇运用siRNA转染（entranster …
阅读更多 »ECL发光液与蛋白激酶Nemo样激酶基因重组腺病毒载体构建研究
Ｎｅｍｏ样激酶（ｎｅｍｏ-ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ，ＮＬＫ）属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。在果蝇、线虫、爪蟾等多种生物中都存在ＮＬＫ的同源蛋白，其结构存在高度的相似性，显示ＮＬＫ在进化过程中十分保守。研究显示，ＮＬＫ能够结合并磷酸化一系列转录因子，参与多个信号通路的调节，其中包括与发育过程密切相关的信号途径Ｗｎ …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与Trim2和神经炎症和认知缺陷研究
神经炎症作为衰老过程的主要特征，参与了包括阿尔茨海默病（AD）在内的多种衰老相关疾病的发病机制。髓样细胞触发受体2（Tyr2）是一种新发现的AD风险基因，通过调节炎性细胞因子的释放调节外周组织的炎症过程。然而，到目前为止，Trim2在与神经相关的神经炎症、认知缺陷和AD样神经病理学中的作用尚不清楚。现分享一 …
阅读更多 »慢病毒、腺病毒、AAV 的检测周期分别是多长？
慢病毒 腺病毒 腺相关病毒 外源基因表达时间 2-4天开始表达长时间稳定表达 1-2天开始表达 持续7-14天 7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 AAV一般注射动物后，会在1周左右开始表达，体内实验一般建议感染后3-4周看第一批结果。持续时间可以长达两年以上。在体内，细胞的生存周期会很长，特别是一些神经元细胞。所以只要细胞不死，AAV基本 …
阅读更多 »RNA转染注意事项
为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之一——实验动物的抓取和固定
在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。 一、小鼠 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手 …
阅读更多 »体内转染与一氧化碳对心脏骤停后改善神经功能作用研究
功能失调的线粒体与心脏骤停（CA）后的神经损伤有关。尽管一氧化碳（CO）在临床前组织损伤模型中显示出各种潜在的治疗作用，但其在CA中的作用机制仍不清楚。现分享一篇体内转染（engreen）与一氧化碳在老年大鼠心脏骤停后改善神经功能的新作用研究的文献，文献旨在研究一种新的一氧化碳放分子对CA术后大脑线粒体功能障碍和神经损伤的影响。 文献地址：htt …
阅读更多 »体内转染（entranster）与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究
脑内出血（intracerebral hemorrhage，ich）可引起有效的氧化应激反应和炎症过程，异甘草素（isoliquiritigenin）是一种类黄酮物质，可以激活核因子e2相关因子2（nrf2）介导的抗氧化系统，负调控核因子b（nf-κbκκ）和nod受体家族。现分享一篇体内转染（entranster）与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究的文献，以供 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与SIRT3基因和非酒精性脂肪肝病研究
作为一种正在全世界蔓延的慢性复杂性疾病，非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）发病率在全球范围内的攀升迅速，被称为“下一场即将到来的世界性疾病大流行”。NAFLD有发展为肝硬化甚至肝癌的风险，对人类健康造成严重威胁。 Sirtuins是一类NAD＋依赖的去乙酰化酶。SIRT3是该家族 …
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