英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常情况下可以通过流式细胞仪来实现，步骤如下： 收集细胞：首先收集感染后的细胞，并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞：可以通过加PI（碘化丙啶）或7-AAD等染料来排除死细胞，这样有助于提高检测的准确性。 流式检测：使用流式细胞仪时，选择FITC通道（通常是FL1通道），因为GFP的荧 …
阅读更多 »病毒载体的基本元件
反转录病毒载体 最常用的反转录病毒载体基于Mo -MLV 。第一代载体所携带的转基因的两侧是2 个完整的LTR, 由增强子(U3) 、R 区（即转录起始区，在病毒颗粒中的载体基因组两端均存在）及U5 区构成。病毒载体的包装主要由包装信号序列（ψ）介导，而邻近的gag序列能够显著提高其包装效率。所有反转录病毒载体均携带一个ψ甲序列和部分gag 序列组成的扩展包 …
阅读更多 »请问那乳胶法能测出失活病毒么
乳胶法（Latex agglutination test）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法，通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒，这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合，形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”（即病毒的活性丧失），但其结 …
阅读更多 »做嘌呤霉素筛选滴定时，感染两天，puro杀3天，5天细胞长得很密原因和解决方法，另外镜下数整个孔的克隆数感觉困难，能换成镜下视野面积与孔面积比换算吗？
问题1：“感染两天，puro杀3天，5天细胞都长很密” 原因： 细胞分裂快（比如 293T）→ 在5天内即使有筛选，还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性，嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议： 缩短时间：感染 24h 后就加 puromycin，第 2 天开始杀，杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度：推荐加大稀释倍数：1:1000，1:5000，甚至 …
阅读更多 »用AAV进行大脑转染的需要知道的问题
使用腺相关病毒（AAV）进行大脑转染是一种常用的基因传递方法，具有较高的特异性和安全性，但在实际操作中也会面临一些问题。以下是一些常见的问题及其解决方案： 转染效率问题： 选择合适的AAV血清型：不同的AAV血清型对不同类型的神经元和大脑区域具有不同的亲和力。选择合适的血清型可以显著提高转染效率。 病毒滴度：确保使用足够高滴度的AAV病毒，但要避免过高的滴度 …
阅读更多 »慢病毒感染后72小时，效率低，细胞已经长满，有什么办法补救？
在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下，可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件： 细胞传代或重新播种：如果细胞已经长满（汇合度较高），可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代，重新播种在新的培养板上，使其达到较低的汇合度（例如30-50%），然后再进行感染。 优化感染时的MOI（Multiplicity of Infecti …
阅读更多 »AAV 载体
腺相关病毒（AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒，无包膜，直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒，因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒，如腺病毒共感染时，它的天然复制能力缺失，与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »靶向eIF4G1根除胰腺癌研究
文献标题 Reprograming immunosuppressive microenvironment by eIF4G1 targeting to eradicate pancreatic ductal adenocarcinoma 期刊与影响因子 期刊： Cell Reports Medicine 影响因子：14.3（2024年） 英格恩（Engree …
阅读更多 »病毒感染细胞实验整体流程
目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过，可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。 1）如果原始 …
阅读更多 »有了它，就能不断发射争对各种病毒的疫苗
2021年2月25日，陈薇团队研发的重组新冠病毒疫苗（腺病毒载体）获批上市。她说：“这个平台好比火箭发射平台，有了它，就能不断「发射」争对各种病毒的疫苗。” 过去的几十年间，复制缺陷的人类重组腺病毒V5（HadV5）已经成为一种广泛应用在真核基因表达分析、疫苗研究等领域的模式系统。这种经修饰后的腺病毒，其E1和E3基因已被移除，依然具备细胞感染的能力，但产生 …
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