英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
可以，但得分情况来看： 如果质粒是线性化了（即被酶切成线状DNA）： 可以电转，但是效率明显低于超级螺旋质粒（超螺旋 plasmid，通常是未切割、天然状态下的质粒结构）。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解，稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候，比如做基因组编辑（CRISPR knock-in）、整合型表达载体（需要基因组插入时），反而故意使用线 …
阅读更多 »客户问：你好，如果电转以后抗性板子上一个没长，无抗的都长满了，这种情况是没电进去，需要增加次数吗，还是其他原因呢？
回答：“无抗的都长满”，说明细胞活性和数量没问题，基本排除培养条件问题。那么核心矛盾集中在质粒是否成功进入细胞并表达抗性基因。这里有几个关键排查点：质粒浓度是否足够（建议>100ng/μL）、抗性基因是否匹配（如氨苄不能用于表达AmpR的质粒）、抗性板浓度是否正确（过高会杀死阳性克隆）。 特别注意的是检查质粒纯度。实验室常用乙醇沉淀法提质粒，但残留的盐 …
阅读更多 »电转染实验的建议
关于细胞的电转染实验，现提出以下几点建议供大家参考： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »QBEmax：一种序列置换且内部保护的碱基编辑器（IF:33.1）
文献标题：QBEmax is a sequence-permuted and internally protected base editor 期刊：Nature Biotechnology 影响因子：33.1（2024年） 文献概要： 胞嘧啶碱基编辑器（CBE）显示出多重基因敲除应用的前景，但不纯的编辑、插入和脱靶仍然经常发生。我们在这里描述了QBEmax …
阅读更多 »基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物
文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase （基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物） 影响因子 14.9（Trends in Biotechnology，20 …
阅读更多 »细胞电转染实验注意事项
选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …
阅读更多 »细胞电转染实验效率不理想的原因
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期 …
阅读更多 »lonza电转,同时电转DNA和RNA，其中RNA的转染效率降低很多，单独RNA，效率很高；共转的时候，RNA的总量是一样的，一个GFP的mRNA，所以可以通过荧光判断表达量，但是当加入DNA后，GFP的荧光就非常差了，用的程序是适用于mRNA的一个程序，有什么建议吗
单独电转mRNA（GFP）信号很好，但一旦同时把DNA一起电转，GFP荧光显著下降。这个往往不是“挤占表达资源”这么简单，更多是由“电转参数 + 细胞先天免疫反应 + 总核酸/盐负载”三方面共同导致。给你一个可操作、优先级排序的排障与优化清单（不需要额外设备就能尝试）： 先做两件最快见效的事 把DNA量往下砍 10–100×（起始试 10 ng～100 ng …
阅读更多 »电转染试剂对比
由此可见，在转染各类细胞系时，Entranster－E具有明显的优势，是一款比较理想的电转染试剂。
阅读更多 »丹参酮IIA磺酸钠抗糖尿病血管衰老机制研究
标题 Sodium Tanshinone IIA Sulfonate alleviates vascular senescence in diabetic mice by modulating the A20-NFκB-NLRP3 inflammasome-catalase pathway 文献概要 该研究探讨了丹参酮IIA磺酸钠（STS）通过调节A20-N …
阅读更多 »