英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞，所以可以有血清转染，同时由于血清的存在，有利于细胞的状态维护，故能提高转染效率。
阅读更多 »RNA转染过程中细胞毒性大怎么办？
RNA转染时细胞毒性大可能的原因有： 1.RNA与转染试剂比例不佳。建议进行预实验优化。 2.细胞密度不佳。调整细胞密度。 3.细胞污染。建议彻底清洁所有细胞培养相关用品。 4.转染试剂毒性较大。建议选择毒性较小的非脂质体转染试剂，如纳米材料的Entranster试剂等。
阅读更多 »RNA细胞转染实验影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »哪些因素会影响细胞转染实验的效率？
1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 还有，尽量选择无 …
阅读更多 »细胞转染的实验方法都有什么？
1. 电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DN被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞，且不需要另外采购特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA，因为细胞的死亡率 …
阅读更多 »细胞转染实验中易出现的问题
细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题，尤其是原代细胞转染，转染难度更大。现分享几个细胞转染实验中易出现的问题，望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …
阅读更多 »请问蛋白半衰期30小时，siRNA转染后大约多久收样合适呢？
既然目标蛋白的半衰期是30小时，说明它在细胞中相对稳定，也就是说，蛋白不会很快降解。 在使用siRNA干扰该蛋白的表达时，有几个关键时间点需要考虑： 一般siRNA作用流程： 转染后6–12小时：siRNA开始被细胞利用，mRNA水平开始下降。 24–48小时：mRNA水平通常显著降低（具体情况因靶基因和细胞类型而异）。 48–72小时：蛋白水平逐步下降，尤 …
阅读更多 »脂质体细胞转染试剂的缺点
已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Bio …
阅读更多 »调控红细胞脱核机制研究
标题 The accumulation of miR-125b-5p is indispensable for efficient erythroblast enucleation 影响因子 该论文发表在《Cell Death and Disease》期刊上，2022年的影响因子为9.0，属于细胞生物学和医学领域的权威期刊。 文献概要 该研究探讨了miR-1 …
阅读更多 »如何上调或下调特定的miRNA？
miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达。最近的研究表明它们影响了约三成的基因。miRNA在多个组织中差异表达，这就让表达图谱分析成为研究的重点。同时，miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。 然而，Peng Jin(埃默里大学) 我们使用RNA oligo和载体的方法。对于RNA oligo方法，我们采用类似siRNA双链的miRN …
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