细胞转染

1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …

1，        质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2，        质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的 …

DNA转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质 …

选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …

    传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入 …

RNA转染时细胞毒性大可能的原因有： 1.RNA与转染试剂比例不佳。建议进行预实验优化。 2.细胞密度不佳。调整细胞密度。 3.细胞污染。建议彻底清洁所有细胞培养相关用品。 4.转染试剂毒性较大。建议选择毒性较小的非脂质体转染试剂，如纳米材料的Entranster试剂等。

在基因转染实验中，共转染的两种质粒通常不一定需要选择不同的载体，但有一些情况下选择不同的载体可能会更有优势： 同源重组和重复序列问题：如果两个质粒使用相同的载体序列，可能会发生同源重组，导致质粒结构不稳定，尤其是在细菌扩增和分离时。这种情况下，选择不同载体可以降低同源重组的风险。 抗性筛选：如果需要通过抗生素筛选两种质粒，最好选择含有不同抗性基因的载体，以便 …

1.细胞密度 　　一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 　　这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 　　还有，尽量选择无 …

老板天天催着要实验进展，是不是很郁闷？可是细胞不给力，是不是很忧郁？刚刚复苏的细胞长的挺好的，可是转染后，细胞状态莫名其妙就变差了，是不是很伤心？转染试剂毒性大，换转染试剂？结果还是一样，是不是很无奈？勉强收了一点点细胞，可是还不够做个western blot的，是不是很抓狂？实验总是不能顺利进行，找不到原因，是不是都要吐血了？没人给指点迷津，是不是心都要碎 …

1. 使用不同的启动子：为两个质粒选择不同类型的启动子，避免它们之间的竞争 这个建议是针对以下情况的： 启动子竞争效应：如果两个质粒使用相同或类似的启动子，尤其是强启动子（例如，CMV启动子），它们可能会争夺有限的转录因子和转录机制资源（如RNA聚合酶）。这种情况下，启动子竞争可能导致一个质粒的表达被抑制，从而影响另一个质粒的表达。 例如，如果两个质粒都使用 …