英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »shRNA转染后，什么时候做RT-PCR最好?
shRNA转染后，进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素，包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说，在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说： 24小时后：在这个时间点，可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA，这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。 4 …
阅读更多 »RNA转染实验效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »siRNA转染进细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »慢病毒感染12孔板种植多少细胞合适
在慢病毒感染实验中，12孔板中种植的细胞密度需要根据以下因素优化： 一般种植密度建议： 悬浮细胞： 每孔种植 1×10⁵ 至 2×10⁵ 个细胞。 贴壁细胞： 每孔种植 5×10⁴ 至 1×10⁵ 个细胞。 对于贴壁细胞，建议种植后培养 24小时，让细胞达到约 30%-50% 的汇合度（confluency），然后进行病毒感染。这种密度能确保细胞有充足的分裂 …
阅读更多 »请问共转染的两种质粒需要选择不同载体吗
在基因转染实验中，共转染的两种质粒通常不一定需要选择不同的载体，但有一些情况下选择不同的载体可能会更有优势： 同源重组和重复序列问题：如果两个质粒使用相同的载体序列，可能会发生同源重组，导致质粒结构不稳定，尤其是在细菌扩增和分离时。这种情况下，选择不同载体可以降低同源重组的风险。 抗性筛选：如果需要通过抗生素筛选两种质粒，最好选择含有不同抗性基因的载体，以便 …
阅读更多 »慢病毒感染，铺板后24小时感染，病毒量是不是按铺板时细胞数的二倍计算的？
一般来说，慢病毒感染时，病毒量的计算主要依据目标MOI（Multiplicity of Infection）以及当前的细胞数量。铺板后24小时的细胞数量可能会有所增加，具体情况取决于细胞的增殖速度。 如果在铺板24小时后进行感染，通常需要考虑细胞的增殖情况来调整病毒量。如果您的细胞在这段时间内大约增殖了一倍，那么可以按铺板时细胞数的两倍来计算所需病毒量，以确 …
阅读更多 »电转染时，指数衰减脉冲形式的电转条件是什么？
对于engreen的Entranster-E电转染试剂，当使用0.4cm比色杯时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm比色杯时，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm比色杯的电穿孔实验，测试电压范围 …
阅读更多 »siRNA转染实验需要知道的关键点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »监测慢病毒载体储备液中的可复制型病毒
一、试剂 完全培养基、DMEM 培养基、胎牛血清（FBS )、慢病毒载体储备液、OptiMEM-I、青霉素／链霉素( P/S ) 溶液（100×)、磷酸盐缓冲盐水( PBS )、聚凝胺（海美溴铵） ( 8mg/mL ) 、QuickTiter 慢病毒滴定试剂盒（慢病毒相关的HIV p24 )、293T 细胞、胰蛋白酶－EDTA ( 0.05%) 二、设备 培 …
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