细胞培养

由于不同人种、不同民族的遗传基因不同，所以对不同疾病， 特别是对复杂疾病的易感性、对各种药物的耐受性和对各种环境因子的反应也不同，建立国人肿瘤细胞株， 可为国人疾病的诊断、防治及药物开发提供肿瘤模型。 （一）材料与设备 1. 无菌材料眼科剪，眼科镂， 一次性培养皿，细胞培养瓶T25 、T75 , 冻存管，一次性小滤器， 一次性离心15~50ml， 高糖DME …

常见的支原体检测方法中最简单、最经济的方法是荧光指示细胞法。该方法使用的荧光染料是烟酸己可碱，其激发波长为350nm（紫外激发），发射波长为420nm。该染料会结合到DNA 中富含A-T 的区域，由于支原体的DNA中A-T 含量占多数(55%~80%），所以可被染色而检测到。支原体污染的细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原 …

荧光表达后的细胞可以在冻存后72小时再测荧光，但有几点需要注意： 细胞存活率：冻存和解冻过程可能会影响细胞的存活率和状态。确保细胞在解冻后恢复良好，具有正常的形态和活力。 荧光稳定性：荧光蛋白的稳定性可能会随时间或细胞状态的变化而有所改变。确保荧光信号在解冻后仍然足够强且稳定。 冻存条件：使用适当的冻存保护剂（如DMSO）并在-80°C或液氮中冻存，以尽量减 …

1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …

将细胞样品与台盼蓝染料混合。活细胞排斥染料，而死细胞被染成深蓝色。将细胞铺在血球计数器的玻板上，显微镜下进行人工计数。 一、材料 血（球）计数计（改进的Neubauer 型），每次用后洗净并晾干。（也可以用其他计数器，只是格子不同。） 血（球）计数计的盖玻片（可重复使用），每次用后洗净并晾干。 含0.4% (W/V) 台盼蓝的PBS 。 计数器 悬浮好的细胞 …

慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。 以下是一些常见的原因和解决方法： 1) 病毒滴度过高: 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 2) 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染 …

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤： 1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑； 2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块； 3、  移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min； 4、&nb …

材料 装在冷冻培养瓶中的HeLa S3 细胞 70%（VIV) 乙醇 完全MEM-10 培养基， 37°C 胰蛋白酶／EDTA, 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V)EDTA, 37°C 转瓶完全培养基－5, 37°C 25 cm2 组织培养瓶 湿润的、37°C 、5%CO2 培养箱 Sorvall H-6000A 转头（或相当的）和 …

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活的方法。MTT，即四氮唑化合物，能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内，甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后，在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值，计算细胞浓度。 需注意的是，MTT只能与活 …