细胞培养

大多数细胞系增殖的最适pH 为7. 4, 当培养液逐渐变酸或变碱时，细胞的活力和增殖率将呈下降趋势。培养液必须缓冲细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺所产生的CO2 及乳酸。人们曾一度用碳酸氢盐、HCO3–与空气中CO2 共同构成一个缓冲体系，碳酸氢盐的低pka(pka=6. 1) 在pH7. 4 左右产生微弱的缓冲效能。无毒缓冲剂，如PIPES(pka=6 …

下述方案描述的是采用胰蛋白酶处理细胞，进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次，在传代的前一天换培养液；但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置一个以上细胞系。 吸干培养单层细胞的细胞培养瓶或培养皿中的培养液。 加入0.05％胰蛋白酶工作液(T-25 细胞培养瓶加入1ml; T-75 细 …

聚集体培养(aggregate culture) 是指先将肿瘤细胞在旋转摇动培养仪上培养，使肿瘤细胞形成规则的细胞球体结构，然后再将球体进行静止培养，肿瘤细胞可自由从球体向周围移动，观察测量肿瘤细胞向周围移动的情况，记录移出细胞数、细胞移出最远距离等，也可计算肿瘤细胞运动的速度，比较不同肿瘤细胞运动性的差别。 （一）材料与设备 50ml 锥形瓶、旋转摇动培养 …

以下是详细的优化建议： 优化质粒用量（首要调整）： 问题： 你目前使用的是3.5µL质粒加入90µL感受态细胞。关键在于质粒的浓度（ng/µL），而不是体积。 3.5µL 对于90µL感受态细胞来说体积不小，如果质粒浓度较高，实际DNA量可能大大超过电转最优范围。 原理： 过量的DNA会导致电击时产生过多的热量和离子效应，严重降低转化效率，尤其对大质粒（&g …

根据细胞在液体或半固体培养基中的生长情况分类，生长特征只是功能上的描述，并与细胞来源有关。 悬浮和贴壁生长是细胞的特性和培养条件，有些细胞可以以两种方式进行。   图1 制备分泌抗特定抗原X 的单克隆抗体的杂交瘤细胞筛选培养基中加入了氨甲啋呤抑制剂，可以抑制核昔酸正常生物合成的药物，所以细胞必须采用其他途径合成核酸，而只有杂交瘤细胞株可以采取这种途径合成核昔 …

体外培养的血管内皮细胞已广泛应用于血管疾病、血管修复、肿瘤血管形成等基础研究及临床研究中。体外培养的血管内皮细胞，仍可保持血管内皮细胞的特征，如表达VIII因子、怀布尔－帕拉德小体(Weibel-Palade body ) 、内皮细胞特异性抗原和IV 型胶原等，还可在三维培养体系或特定诱导条件下形成血管样结构。体外培养的血管内皮细胞生长形成单层后，会表现出接 …

此种方法最为可靠且成本低廉， 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。 （一）材料与设备 1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制， 高压除菌（加20％胎牛血清）。2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。 （ …

根据来源分类 原代细胞分离于动物或植物的组织，经培养获得。细胞一旦分裂就成为有限传代细胞株，并且有可能变成无性增殖化细胞。把正常细胞来源的有限传代细胞株持续传代，筛选出快速生长的细胞，就有可能把有限传代细胞祩转变成持续传代的细胞株，这个操作就是自然转化。   来源   与组织相溶性 维护 加倍 原代细胞 动物组织、胚胎或成体 典型 难 0 …

划痕实验是一种简单易行的检测肿瘤细胞运动的方法， 实验成本低， 可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。 （一）材料与设备 6 孔板或者培养皿， 10 μl 或者200μl 无菌的枪头， Marker 笔，直尺。 （ 二）操作步骤 1. 先用Marker 笔在6 孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，每隔0.5-1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5 条线。 …