Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相残不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用 …
阅读更多 »western-blot化学发光(ECL)出现高背景的原因是什么?
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清楚“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充 …
阅读更多 »2024诺贝尔化学奖之蛋白质结构预测
蛋白质结构预测(Protein Structure Prediction)是一项利用计算方法预测蛋白质分子的三维结构的技术。由于蛋白质的功能很大程度上依赖于其三维结构,预测其结构对理解生物过程、药物设计等领域具有重要意义。然而,实验确定蛋白质结构(如X射线晶体学、核磁共振等方法)耗时费力,因此计算预测成为重要替代方法。 蛋白质结构预测的主要方法 同源建模(H …
阅读更多 »western-blot实验中ECL发光检测操作步骤
ECL Western特异发光检测试剂盒用于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸检测。下面以engreen的超敏型ECL发光液Enlight-Plus为例,说一下检测实验步骤。 1. 常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。 注意:Enlight-Plus 推荐的抗体稀释度为: 储存液浓度为1mg/ml 的一抗推荐稀释度 …
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