慢病毒滴度较低,通常需要较高的 MOI(如 20)才能有效感染,而正常病毒滴度较高,合适的 MOI 可能为 0.1。要将两者放在一起进行比较,可能需要考虑以下因素: 实验目的: 如果关注的是相同数量的感染细胞,可以根据感染效率调整 MOI,以保证相似的感染率。 如果关注的是病毒自身的感染特性,可能需要分别选择最佳 MOI 进行单独实验,再综合分析。 病毒载量 …
阅读更多 »siRNA转染与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞(l929-a)和L929纤维肉瘤细胞(l929-n)是不同的细胞系,常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α(TNFα)的研究,TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而,当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时,l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死,在l929-a中却不是 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与脊髓损伤后神经细胞凋亡研究
脊髓损伤(SCI)是一种常见的创伤,在损伤组织初始损伤后小时和几天内会有二次细胞变性的发生,会影响到感觉和病变部位运动信号以及神经系统的传导。脊髓损伤后的神经退行性疾病是严重的,其中许多与SCI患者终生残疾有关。现分享一篇RNA转染(Entranster)与脊髓损伤后神经细胞凋亡研究的文献,以供参考。
阅读更多 »DNA转染(Entranster)与抗病毒天然免疫研究
天然免疫是保护宿主细胞免受微生物感染的第一道屏障。TANK结合激酶1(TBK1)介导的I型干扰素(IFN)诱导在宿主抗病毒反应及免疫平衡方面起着至关重要的作用。现分享一篇运用DNA转染(Entranster-H4000)研究抗病毒天然免疫的文献,以供参考。
阅读更多 »转染荧光效果良好,但是24小时qpcr没有敲低,是要延长收样时间吗?
这是个很实际的问题。在转染实验中,荧光标记良好说明转染效率高,但如果qPCR在24小时没有观察到预期的基因敲低效果,可能存在以下几种情况: 1. 延长收样时间可能是一个方向 有些siRNA或shRNA介导的敲低效果在48小时甚至72小时后才会明显,因为: mRNA的半衰期可能较长; 敲低并不等于马上降解已有的mRNA; 目标蛋白的表达也可能滞后。 建议: 设 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与Tan IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用机制研究
丹参酮 IIA(Tanshinone IIA,Tan IIA)是一种从丹参干根中提取的生物活性物质,具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。然而,Tan IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用机制仍有待进一步阐明。现分享一篇运用RNA转染(Entranster)的方法的文献,通过阐明Tan IIA在p53基因缺陷的H1299细胞中的抗肿瘤作用机制,以确定丹参酮IIA …
阅读更多 »体内转染(entranster)与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究
脑内出血(intracerebral hemorrhage,ich)可引起有效的氧化应激反应和炎症过程,异甘草素(isoliquiritigenin)是一种类黄酮物质,可以激活核因子e2相关因子2(nrf2)介导的抗氧化系统,负调控核因子b(nf-κbκκ)和nod受体家族。现分享一篇体内转染(entranster)与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究的文献,以供 …
阅读更多 »做嘌呤霉素筛选滴定时,感染两天,puro杀3天,5天细胞长得很密原因和解决方法,另外镜下数整个孔的克隆数感觉困难,能换成镜下视野面积与孔面积比换算吗?
问题1:“感染两天,puro杀3天,5天细胞都长很密” 原因: 细胞分裂快(比如 293T)→ 在5天内即使有筛选,还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性,嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议: 缩短时间:感染 24h 后就加 puromycin,第 2 天开始杀,杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度:推荐加大稀释倍数:1:1000,1:5000,甚至 …
阅读更多 »RNA转染与LncRNA SNHG12对胃癌细胞BGC-823增殖影响的研究
胃癌是一种常见的上皮性癌,是世界范围内最常见的第五种恶性肿瘤。近年来胃癌的发病率一直呈上升趋势。每年约有一百万例胃癌发生,其中东亚地区占到50%,尤其是中国,严重危害人民健康和生命。中国胃癌的年发病率约为400000,占全世界病例总数的42%,并且总死亡率逐年上升。因此,寻找可靠的胃癌标志物和靶点是至关重要 …
阅读更多 »细胞DNA转染注意事项
1)优化条件:质粒不同,所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外,可选用更合适的转染试剂,如Entranster试剂。 2)抑制剂:不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素,EDTA,柠檬酸盐,磷酸盐,RPMI,硫酸软骨素,透明质酸,硫酸葡聚糖或其他硫酸 …
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