1, 质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 2, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的 …
阅读更多 »体内转染与GATA-4调节脑出血后神经元凋亡研究
GATA结合蛋白4(GATA-4)是GATA转录因子家族的成员,在正常大脑中表达,参与神经炎症反应和衰老。然而,关于GATA-4是否与脑出血(ICH)引起的脑损伤有关的研究很少。现分享一篇体内转染(entranster)与GATA-4调节脑出血后神经元凋亡研究的文献,以供参考。其研究的目的是在体内和体外探讨GATA-4在ICH诱导的继发性脑损伤 …
阅读更多 »如何得到更高的DNA细胞转染效率?
我认为,要想更高的细胞DNA转染效率,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率 …
阅读更多 »RNA转染与Cav3通过Wnt信号通路与骨质疏松大鼠模型骨形成研究
骨质疏松症是一种以骨密度和骨强度降低为特征的疾病,常见于老年人。Caveolin-3(Cav3)是caveolae膜结构域的主要结构蛋白,已被报道可参与细胞信号传导和维持细胞结构。现分享一篇RNA转染(entranster)与Cav3通过Wnt信号通路对骨质疏松大鼠模型骨形成的影响研究的文献,以供参考。 文献地址:https://link.spr …
阅读更多 »EXP BIOL MED 2015 : 冠状动脉微栓塞! PDCD4/NF-κB有关?
广西医科大学附属第一医院心内科的老师在临床实践中发现,冠状动脉微栓塞(CME)是急性心肌梗死的常见并发症,发生率约10%~20%,是影响微心肌微循环灌注的主要原因。 NF-κB激活是CME引起的心肌炎的重要因素。在早期的研究中,广西医科大学附属第一医院心内科的老师就发现,Pdcd4介导的信号通路在CME引起的炎症可能发挥一个重要的角色。 在研究中,老师们使用 …
阅读更多 »体内转染与CREB1基因沉默和血管性痴呆小鼠认知功能障碍研究
血管性痴呆(VD)是老年痴呆的第二大病因,仅次于阿尔茨海默病(AD),在西方国家占所有痴呆病例的17.6%,研究表明在世界东部地区,包括中国和日本人口中,认知功能障碍的人数要更多。认知功能障碍广泛被认为是痴呆患者的经典特征。VD,以各种脑血管疾病为特征的损伤综合征主要与缺血性脑血管疾病相关。目前,VD的确切发病机制仍不清楚。因此,有必要更详细地阐明该病症背后 …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下mRNA转染步骤(24孔板) 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么 …
阅读更多 »siRNA答疑专题总结(上)
Q1:如果慢病毒载体中没有抗性标记,只有GFP,请问还能筛选稳转的细胞传代培养吗? A1:采用流式分选是流式细胞仪的一个功能,有流式细胞仪就可以了。一般实验室对流式都有专门的人员操作,不需要自己动手。由于没有抗性,需要注意分选过程的无菌操作。 Q2:RNA干扰如果用慢病毒做稳转的细胞株,什么样的目的RNA都可以用来干扰来做稳转的细胞株吗,目的RNA所编码蛋白 …
阅读更多 »分步转染,先电转GFP-mRNA,表达很好,然后第二天电转了一个红色荧光DNA质粒,第三天观察的时候只看到了少数细胞有红色荧光,看不到绿色荧光了,这是怎么回事呀?按说GFP已经表达了,怎么还能消失了呢
根据你的描述,GFP在第一天有很好的表达,但在第二天转染DNA质粒后,第三天绿色荧光消失,只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素: 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制:你已经电转过mRNA,然后再转DNA质粒,这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应,比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译,不仅影响红色荧光蛋白(DNA …
阅读更多 »动物体内转染实验时,不同组织的核酸分布情况是怎样的?
使用Entranster体内试剂转染核酸时,如果通过尾静脉注射,确实不同组织的分布有差异。一般来说,肝、肺、肾的分布最高。一般分布高的地方转染效率也相对较高。但不是其他的组织器官效果就不好,相反,对绝大多数的器官组织来说,采用体内转染技术,效果也很好。比如一般认为神经细胞难以转染,而且尾静脉动物给药,通过血 …
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享