细胞生物学

1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细胞污染 细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀：将提完质粒后或者提的最后一步 …

回答：不建议简单地“一直用加抗生素的培养基放着等两天”。 这样做的主要风险在于： 细胞密度过高：细胞会因接触抑制而停止生长，但会持续消耗营养并产生大量代谢废物，导致培养基迅速变酸（变黄），细胞健康状态急剧下降，甚至大量死亡。 死亡细胞干扰：凋亡或坏死细胞的DNA和内容物会释放到培养基中，这些物质对周围存活细胞有毒性，会严重影响后续筛选出的细胞系的健康度和筛选 …

根据你的描述，GFP在第一天有很好的表达，但在第二天转染DNA质粒后，第三天绿色荧光消失，只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素： 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制：你已经电转过mRNA，然后再转DNA质粒，这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应，比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译，不仅影响红色荧光蛋白（DNA …

可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考 …

miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达。最近的研究表明它们影响了约三成的基因。miRNA在多个组织中差异表达，这就让表达图谱分析成为研究的重点。同时，miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。 然而，Peng Jin(埃默里大学) 我们使用RNA oligo和载体的方法。对于RNA oligo方法，我们采用类似siRNA双链的miRN …

1. RNA与转染试剂比例不佳    由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳    调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …

1. 电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DN被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞，且不需要另外采购特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA，因为细胞的死亡率 …

为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

乳胶法（Latex agglutination test）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法，通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒，这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合，形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”（即病毒的活性丧失），但其结 …