· 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。 · 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。 · 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。 · 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤 …
阅读更多 »western-blot实验过程常见问题
常见问题 …
阅读更多 »常用的蛋白水解酶抑制剂
当细胞被裂解,内容物释放时,蛋白水解酶和其他一些降解的酶也一同被释放,这时候需要在裂解的缓冲液中加入蛋白水解酶。PS: 细胞自己的蛋白水解酶也会降解细胞内的蛋白质。 抑制剂 靶向的蛋白酶 有效浓度 储存浓度 其他 抑蛋白酶肽 丝氨酸蛋白水解酶 0.1-2ug/ml 10mg/ml溶解在PBS中 避免反复冻融 EDTA 金属蛋白水解酶 0.5-2mmol/L …
阅读更多 »限制酶和DNA 甲基化酶
限制酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA 序列之内或其附近的特异位点上,井在此切割双链DNA 。它可分3 类,分别是第一型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。 I 类和Ⅲ类限制酶在同一蛋白质分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP 的限制(切割)活性。Ⅲ类限制酶在识别位点上切割DNA ,然后从底物上解离。 …
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