材料 SP2/0-Ag14 骨髓瘤细胞系(药物标记的非分泌型; ATCC) 添加10mmol/L HEPES 和1mmol/L 丙酮酸钠的DMEM- 10 和DMEM-20 完全焙养基 免疫的实验动物:小鼠、大鼠或仓鼠(在初次接种后10~14d 备用) 50% (m/V) PEG 溶液,无菌 DMEM 完全培养基,未添加血清 氯化铵溶液: 0. 02mol/ …
阅读更多 »去除去污剂的可行性
去除去污剂的可行性(根据Harlow 和Lane 1988) 离子型去污剂 用分子筛G25 柱子进行凝胶过滤,对于一些蛋白质来说,用低于临界微团浓度的另一种去污剂来平衡柱子。 加入8 mol/L 的尿素, 然后把去污剂加到离子交换柱上,让蛋白质在8 mol/L 的尿素中流动,再透析去除尿素。 对于离子型的去污剂,有一个相对较低的微粒大小和较高的临界微团浓度, …
阅读更多 »限制酶和DNA 甲基化酶
限制酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA 序列之内或其附近的特异位点上,井在此切割双链DNA 。它可分3 类,分别是第一型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。 I 类和Ⅲ类限制酶在同一蛋白质分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP 的限制(切割)活性。Ⅲ类限制酶在识别位点上切割DNA ,然后从底物上解离。 …
阅读更多 »慢病毒感染,胶体金测出来很高,可感染效果很差的原因
慢病毒感染效率低,尽管用胶体金测试显示滴度很高,可能有以下几个原因: 病毒颗粒质量:虽然胶体金检测显示病毒滴度很高,但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损,无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异:胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量,但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒(感染性单位)可能比实际检测的数量要低 …
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