英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
ChIP的一般流程： 甲醛处理细胞—收集细胞，超声破碎—加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合—加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀—对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合—洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物—解交联，纯化富集的DNA-片断 …
阅读更多 »离心机的种类
有很多关于离心机类型的描述性术语，但那些不是严格的定义。在实验室中，离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置，之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机， 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上，反而经常放在桌子底下。 用途：沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数： 角式17000 …
阅读更多 »单克隆抗体制备中的免疫接种
材料靶抗原： 表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗氏完全佐剂(complete Freunds adjuvant, CFA)实验动物： 无病原体大鼠、小鼠或仓鼠弗氏不完全佐剂(incomplete Freunds adjuvant, IFA)1~2ml玻璃注射器（有Luer-Lok 接头，已消毒）三通管100ml 烧杯20G …
阅读更多 »双向电泳相关试剂配制
1． Bradford 工作液 95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250，溶解完后再加磷 85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶 考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存（Bradford不稳定，一周内有效） 2． 裂解液 尿素 8M 硫脲 2M CHAPS 4% DTT 60 mM Tris—base 4 …
阅读更多 »如何将胶内物质转移到膜上？
凝胶是厚而易碎的基质，这使得操作与温浴都很困难。如果要对胶内的内容物进行杂交，必须将内容物从凝胶引导到硝酸纤维素膜或者尼龙膜上。这一过程称为转移。 转移之后，滤膜与一个探针温浴，观察探针是否能与滤膜上的分子杂交。探针由放射性元素或者其他指示剂标记，所以可以被检测。滤膜与探针的杂交称为印迹。 第一次使用印迹技术是由Southern 描述的， 因此， 这种印迹被 …
阅读更多 »western-blot实验常见问题及解决方案（enlight）
2024年诺贝尔化学奖之计算蛋白质设计
计算蛋白质设计（Computational Protein Design）是一种利用计算机算法来设计具有特定功能和结构的蛋白质分子的方法。该领域的目标是通过计算预测蛋白质的结构与功能关系，以设计出符合特定需求的全新蛋白质或优化已有蛋白质，应用广泛于药物开发、酶工程、生物材料等领域。 计算蛋白质设计的核心步骤 确定设计目标：首先明确蛋白质设计的目标，例如设计具 …
阅读更多 »测定蛋白质浓度前需要知道什么？
因为蛋白质是细胞结构与功能的主要分了成分，因此常常需要测定样品中蛋白质的含量，鉴定混合物中的特殊蛋白质，以及分析蛋白质的组成和序列。此外，蛋白质分析对合成用于诱导抗体生成的多肽，设计供克隆用的寡核苷酸探针以及证实序列数据的正确性是十分必要的。 为确保蛋白质通过电泳技术获得最好的分离，首先有必要估计待测样品中蛋白质的浓度。如果不做分析，蛋白质总量不足就可能妨碍 …
阅读更多 »western-blot化学发光（ECL）出现高背景是什么原因？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充 …
阅读更多 »ELISA不得不懂的实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体 …
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