英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
现分享一下我们实验室的悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释 …
阅读更多 »体内转染与颅内静脉高压血管生成调控作用研究
静脉高压（VH）在脑动静脉畸形（AVM）发病中起重要作用，与HIF-1α/VEGF信号通路密切相关。核因子-红系2相关因子2（Nrf2）显著影响血管生成，但脑动静脉畸形中VH与Nrf2和VEGF的相互作用尚不清楚。现分享一篇体内转染（Entranster）与VEGF和Nrf2相互作用对颅内静脉高压血管生成的调控作用研究的文献， 以供参考。
阅读更多 »siRNA细胞转染注意事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »质粒DNA转染注意事项
1， 质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转 …
阅读更多 »细胞转染实验影响因素有哪些？
1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 还有，尽量选择无 …
阅读更多 »ECL发光液与幽门螺杆菌抑制TRAF1的裂解研究
胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，也是导致癌症死亡的第三大原因。幽门螺杆菌（H.pylori）是一种革兰氏阴性、螺旋状的病原体，是慢性胃炎、胃溃疡、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的一个强有力的危险因素。幽门螺杆菌的致病机制主要取决于细菌间的相互作用。因素和宿主细胞。幽门螺杆菌（H. …
阅读更多 »RNA转染（entranster）与miRNA-183促进黑质神经元凋亡研究
帕金森病是一种常见的神经系统疾病，是典型的纹状体功能障碍模型。它是仅次于阿尔茨海默病的第二常见神经退行性疾病。帕金森病的特征之一是黑质多巴胺能神经元的逐渐丧失。帕金森病患者通常有震颤、僵硬和运动迟缓的症状。遗传因素和环境因素已被纳入帕金森病的病因。对下丘脑核进行高频脑深部刺激是一种流行的外科治疗方法，但不适用于早期的PD，发展中国家的患者也无法获得。现分享一 …
阅读更多 »提高细胞转染效率的要点
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »RNA转染注意事项
为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与氧化应激诱导单核细胞坏死研究
细胞坏死是一种缺乏细胞凋亡和自噬特征的细胞死亡。在过去的几年里，人们发现坏死的发生和过程是程序化的，并且受到严格的调节。大量研究表明，死亡配体（如CD95L、TNF和TNF相关的凋亡诱导配体）诱导依赖于含死亡结构域（dd）激酶rip1活性的caspase独立的坏死样细胞的死亡。虽然坏死的诱导机制越来越清楚，但这一过程的执行仍然有些难以捉摸。现分享一篇ECL发 …
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