2022年 1月 28日, 星期五
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cDNA文库构建分为哪些阶段?

cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。从而做cDNA克隆时应是先从获得mRNA开始,在此基础上,通过反转录酶作用产生一条与mRNA相互补的DNA链,然后除掉mRNA,以第一条DNA链为模板复制出第二条DNA链(双链);再进一步把此双链插入原核或真核载体。

cDNA文库的构建分为六个阶段:

阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链

阶段2:cDNA第二链的合成

阶段3:cDNA的甲基化

阶段4:接头或衔接子的连接

阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA

阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接

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