2022年 1月 28日, 星期五
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同样是慢病毒感染,为什么你的感染效率那么低?

在慢病毒感染细胞过程中,会遇到哪些问题呢?

1.在细胞感染时, MOI是一个非常重要的指标,如何确定MOI值呢?

MOI:复感染指数,是指病毒对细胞的感染能力,MOI越高,细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。

MOI=(病毒滴度×病毒体积)/细胞数目

感染条件及MOI的选择原则:

1. 在细胞形态不受影响的情况下尽可能用少的病毒感染细胞

2. 选择感染效率80%左右的作为最佳感染条件

通过细胞感染预实验可以知道慢病毒对细胞的最佳感染条件,来确定细胞的MOI,进行正式实验。

如何解决细胞难感染的问题?

慢病毒对细胞的感染效率受多个因素影响,如细胞自身生长的状态,细胞数量,细胞被慢病毒感染的难易程度等。因此保证细胞正常增殖,轮廓清晰,合适的细胞密度,选择最优的感染条件可以更好的保证感染效率。

对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,可以通过添加病毒感染增强液来显著提高转染效率。EnvirusTM-LV试剂是英格恩生物公司最新研发合成的新型纳米聚合物病毒感染增强试剂(病毒转染试剂)。该试剂采用纳米技术合成,由于纳米技术的应用,EnvirusTM可大大提高慢病毒的感染效率。并且毒性很小,操作简单,可以提高病毒感染能力20-50倍。

此外,对于悬浮细胞,可采用离心感染方法,减少病毒感染时的体积,从而进一步提高感染效率。如将细胞培养板密封后,用平角转子离心机1000g离心1h,再放回培养箱中正常培养。

除了难感染外,加入慢病毒后,细胞死亡也是科研的又一拦路虎。

加入慢病毒后,细胞死亡很厉害,该如何处理?

慢病毒中的杂质是造成细胞毒性的主要因素。一定根据自己的实验需求,选择合适纯度的慢病毒!

如果不幸,遇到了细胞死亡的情况!怎么办?

调整并降低感染的MOI值,并且在感染后4小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察;若发现细胞状态变差时,则需要立刻对细胞进行换液操作,使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。

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