2022年 8月 17日, 星期三
新闻

双向电泳相关试剂配制

1. Bradford 工作液

95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250,溶解完后再加磷

85%磷酸 52ml 酸,最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶

考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存(Bradford不稳定,一周内有效)

2. 裂解液

尿素 8M

硫脲 2M

CHAPS 4%

DTT 60 mM

Tris—base 40 mM(如果有条件可以添加PMSF 0.5mM和5%的Pharmalate)

3.水化液储液

尿素 8M

硫脲 2M

CHAPS 4%

Tris—base 40 mM

4.分离胶buffer (pH8.8) 250ml

SDS 0.4% 1g

Tris—HCl 1.5M 45.4275g

5.浓缩胶buffer (pH6.8) 100ml

SDS 0.4% 0.4g

Tris—HCl 0.5M 6.07g

6.凝胶储存液(30%的丙烯酰胺)250ml

Acr 29.2% 73g

Bis 0.8% 2g

7.电极缓冲液(跑一次要配制2500ml)

甘氨酸 43.2g 36g

Tris 9g 或 7.5g

SDS 3g 2.5g

超纯水定容至3000ml 超纯水定容至2500ml

8. 0.5M Tris —HCl pH 6.8储液

6.1g Tris先用30ml超纯水溶解,再用46ml,3M HCl调pH6.8,再加水定容至100ml

9. 平衡液储液

脲(即尿素)36g

甘油 30% 30ml

SDS 1% 1g

0.5M Tris—HCl pH6.8 10ml 超纯水定容至100ml

10.平衡液A(一根胶条)

DTT 20mg

平衡液储液 10ml

11.平衡液B(一根胶条)

碘乙酰氨 300mg

平衡液储液 10ml

0.05%溴酚兰 15μl (平衡液A、B均需临时配制)

12.0.5%琼脂糖10ml

琼脂糖 0.05g

电极缓冲液 10ml

溴酚兰 25μl

补:4、5、6的溶液需过滤后储存于4℃备用。

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