2022年 8月 17日, 星期三
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Northern Blot原理及所需仪器、试剂

一、原理:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而将在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上,固定后再与同位素或其它标记物标记的RNA探针进行反应。

  • 用途:检测样品中是否含有基因的转录产物(mRNA)及其含量。

二、仪器与试剂

  • 仪器:  恒温水浴箱,电泳仪,凝胶成像系统,真空转移仪,真空泵,UV交联仪,杂交炉,恒温摇床,脱色摇床,漩涡振荡器,分光光度计,微量移液器,电炉(或微波炉),离心管,烧杯,量筒,三角瓶等。
  • 材料:  总RNA样品或mRNA样品,探针模板DNA(25 ng),尼龙膜
  • 试剂:NorthernMax Kit(Cat. # 1940,Ambion, Inc.),琼脂糖,DEPC, X光底片,底片暗盒,Random Primer, dNTP Mixture,111 TBq/mmol[a-32P]dCTP,Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS,双氧水,灭菌水等。

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