DNA 样品的酚抽提

酚抽提通常用来对DNA 或RNA 样品进行蛋白质的去除。酚与水不互溶,当它们混合时会形成两相,水相和酚相。当含有DNA 的水溶液与酚混合时,蛋白质会进入酚相,再将含DNA 的水相取出进行再抽提和乙醇沉淀浓缩。

一、材料

  • 抗有机溶剂的塑料管,尝试尽可能小的体积,大多数的抽提可以在微量离心管中进行。
  • TE 饱和的酚:氯仿:异戊醇(25 : 24:1)
  • 氯仿:异戊醇(24 : 1)
  • 移液器和移液头

二、步骤

  1. DNA样品中加入等体积的TE饱和的酚氯仿,对于1.5 ml 的微量离心管,总体积不应超过500 μI 。
  2. 剧烈振荡20 s 。
  3. 样品在室温离心5 min, 分相,这个步骤不需要很高的转速,但是通常用最高转速比较方便。小心地从离心机中取出样品,不要搅动分开的两相
  4. 在不搅动蛋白质层的情况下,用移液器小心地将尽量多的水相转移到新的离心管中。
  5. 向水相中加入等体积的氯仿,重复步骤2 、3 和4 。
  6. 做好标签,现在就准备用乙醇沉淀浓缩

为了提高产量:如果觉得没有得到足够的水相,可以在酚相加入与酚相等体积的pH 7.5 的TE, 对酚相再次抽提、振荡、离心。如果两次抽提的体积小于500 μl, 可以将它们合并,但是最后你会发现在这个管子里几乎没有DNA。一般对酚相进行常规的酚抽提是不值得的。

为了提高纯度:如果你觉得可能已经混入了蛋白质层,那么可以加入与水相等体积的酚氯仿再次抽提水相、振荡、离心。如果发现DNA 的酶反应不能正常进行,那么DNA 样品必须进行2 次抽提。

 

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