DNA的乙醇沉淀

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的,而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。

一、步骤

  1. 于最多体积450 μl 的DNA 样品中,加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。
  2. 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇,充分混匀。
  3. 样品踩于冷环境中沉淀:-20℃ 过夜,或-70℃30 min, 或干冰中5 min 。

使用干冰进行乙醇沉淀

用锤子将干冰砸成粉末,再将管子插入粉末;或将干冰砸成小块,置于抗冻容器中,加入95% 乙醇捣成稀泥,插入管子。注意:乙醇会洗去标签。

 

图一 离心之后离心管中分为两层
1:上县为水相,包含着DNA ,下层为有机相,包含蛋白质。通常存水相与有机相之间有一个中间层,可见一个白色带, 这是一些被抽提出来的蛋白质。在你吸取水相的时候,不要碰那个白色带。
  1. 高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机,将离心机置于4℃ 。
  2. 除去上清,上清可以倒入下水道中。
  3. 离心管倒置于纸巾上吸干。
  4. 预冷的70%乙醇洗涤沉淀。
  5. 按步骤6干燥或使用真空浓缩机。
  6. 用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解,加入更多的TE, 将样品保存于4℃。

三、温馨提示

在处理大分子DNA (大于30 kb) 时要特别小心,由于DNA 样品不能抹荡,只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿,代替用乙醇沉淀DNA 样品的是, DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。

 

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