蛋白质分离实验——细胞裂解方法

当分离蛋白质时,包含有蛋白质的细胞和细菌须先被裂解。
物理法裂解。利用各种机器来完成,例如:
1. 氮气气穴弹。氮气解压是裂解真核细胞的一种温和方法,存在于一定压力下的氮气与细胞内的氮气达到平衡。释放压力时,溶液中产生的氮气和间歇的气泡导致单个细胞膜的破裂,但不再有进一步的细胞裂解发生,细胞器还是保持完整,而且氮气产生的压力和气温降低都会保护蛋白质不被降解。
2. 匀浆器。基本上是个搅拌机,对细胞施加剪切力。不适合细菌,除非加上玻璃珠。
3. 超声处理器(超声波仪)。超声波可以产生很多的小气泡,不仅能破裂细胞,而且会切断DNA 。加上玻璃珠可以用于破裂细菌。
4. 冷冻压力器。在冷冻压力下,细胞只能通过一个很狭小的孔,所产生的剪切力和裂解力足以让细胞壁破裂。
5. 珠子碾磨匀浆器。细菌、孢子或者酵母在含有玻璃物或者锆珠的管子中通过强烈震荡,细胞受珠子的震动和轰击在几分钟之内就被裂解。
6. 去污剂。去污剂被用来有效地裂解许多真核细胞,去污剂的使用取决于裂解细胞的用途。使用前要认真检查去污剂的来源,因为它们的质量和纯度对于成功分离蛋白质有很大的影响。
        1)阴离子去污剂包括胆汁酸盐、辛酸盐、SDS (十二烧基硫酸钠)、脱氧胆酸等。
        2)阳离子去污剂包括氯化十六烧基吡啶和氯化苯甲烷藻胺。
        3)两性离子去污剂,例如: CHAPS 和卵磷脂。
        4)非离子型去污剂,例如:洋地黄苷昔、Tween-20 、Triton X-100 。
非离子型的去污剂都是很温和的,不会破坏核膜,它们通常用于免疫共沉淀之前裂解细胞。0.1 %的Triton X-100 的水溶液就可以裂解大多数哺乳动物的细胞,加到0.5 %也不会对要分离的大部分酶产生危害。许多酶,如蛋白酶K ,在Triton X-100 的存在下仍然有活性。

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