细胞复苏的步骤

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内,保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的,通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养,以获得最大的生存能力,为了除去冻存时的添加剂, 24 小时后要更换培养基。

一、材料

  • 培养基, 37’C 预热
  • 培养瓶
  • 装有70 %乙醇的烧杯
  • 1ml 、10ml 的移液管、移液器及移液头

二、步骤

  1. 把冻存细胞的管子在37’C 的水浴融化,快速摇动, 1分钟内使管内的细胞融化。
  2. 把融化的管子浸入装有70 %乙醇的烧杯内,整个实验在超净台内进行。
  3. 小心打开冻存管,不要让乙醇浸入管内。
  4. 将冻存管内的细胞转移到培养瓶中,并立即加入预热的培养基。
  5. 盖好培养瓶的盖子,培养24 小时。
  6. 用新培养基替换老培养基。
  7. 继续培养2~3 天或按说明书上的建议进行操作。

三、温馨提示

1.融解的细胞必须马上培养,如果来不及培养,就保存在液氮中。

2.细胞通常冻存为1 ml 的体积,加入新的培养基至10ml 。

3.可以在融化了冻存细胞后,把细胞离心下来,并用新鲜的培养基重新悬浮细胞,这种做法只适用于那些对冻存剂敏感的细胞,或者笫二天因为有事不能更换新培养基的情况。

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