将DNA 导入细胞和微生物

分离后, DNA 经常被用于导入细胞和微生物,用来观察受体菌表型的改变或收获大批的供体DNA 及其翻译产物。

原核细胞

转化是细菌与分离的DNA 重组后发生遗传基因的改变。转化通常用来扩增克隆的DNA, 另一个常见的用途是获得大量特定的蛋白质——转化了表达载体的细菌将产生大量的DNA 编码的蛋白质。细菌转化主要有两种方法。

  • 与高浓度的钙离子温育,导致细菌的脂膜接受外源DNA, 步骤简单快捷,几分钟就可以完成。
  • 电转化。电转化能获得更高的转化效率,其最佳转化条件随细菌物种甚至株系变化而变化。

真核细胞

真核细胞的转化方法有几种,但通常都有物种和株系的特异性。这个过程被称之为转染,它是转化和感染(病毒介导的基因传递被称之为感染)的结合。

在稳定转染中,携带DNA的细胞会通过表达一些报道基因而被选择出来[通常是能抵抗抗生素或用FACS 来选择表达GFP (绿色荧光蛋白)的细胞]。细胞株是由表达细胞的单个克隆培育而来的。

瞬时转染通常用于搜集DNA 对于细胞作用的短时信息。通常,瞬时转染的使用是有局限的,转染了目的DNA的细胞数不确定(受转染效率的影响),每个细胞中转染的DNA拷贝数也不确定。另外,由于转染过程具有伤害性,而这种伤害性又难以控制,所以结果难以解释。瞬时转染的分析常常被用来作为转染效果的预测,为稳定表达后的表型做准备。

真核细胞的转染有许多方法,包括:

  • 磷酸钙共沉淀法
  • DEAE 右旋糖苷介导的转染
  • 脂质体介导的转染
  • 电转化
  • 微注射
  • 病毒介导的转导。腺病毒、逆转录病毒和SV40 通常用于介导DNA 进入细胞。

由于DNA 的转染效率主要取决于细胞类型,为了避免浪费大量时间,在转染前必须调查所使用细胞的转染方法,查阅文献、上网或打电话询问操作步骤。

另外,载体也是决定转化转染结果的关键,在选择载体的时候,要慎重。

0%

User Rating: 4.41 ( 1 votes)

推荐

抗体的使用以及储存方式

一、什么是抗体 抗体是一些淋巴 …

发表评论

您的电子邮箱地址不会被公开。 必填项已用*标注