2022年 8月 17日, 星期三
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如何利用好腺病毒感染的原理和特点?

一、原理

腺病毒(Adenovirus,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型,大多数Ad载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制,因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

二、特点

1) 几乎可以感染所有类型的细胞

2) 可以获得复制缺陷型 (E1 和 E3 缺失)  的腺病毒

3) 病毒滴度高,产生病毒经过浓缩后可以达到 1012 PFU/mL,能有效的进行增殖。

4) 腺病毒载体感染宿主的范围比较广,制备容易,操作简单.

5) 感染细胞时,不整合到染色体中,不存在激活致癌基因或插入突变等危险,生物安全性高。

三、腺病毒包装简要流程

1) 构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体

2) 采用 PacI 消化纯化的质粒。

3) 消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞,收获细胞以制备病毒粗提液。

4) 将病毒粗提液感染 293A 细胞以扩增病毒。

5) 分装,-80℃保存。

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