2022年 1月 28日, 星期五
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如何利用好慢病毒感染的原理和特点?

一、原理

慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。

二、特点

1) 直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 

2) 可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

3) 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。

4) 无需任何转染试剂,操作简便。

5) 可以根据客户需要制备多种标记。

三、慢病毒包装简要流程:

1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。

2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。

3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。

4) 病毒的纯化和浓缩。

5) 分装、- 80 ℃保存。

6) 滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。

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