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支原体污染的7大问题

之前本站发表过一篇关于细胞污染的预防及拯救的文章,部分朋友对于支原体污染有一定的困扰,现就支原体污染常见问题进行解答。

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Q1: 支原体污染对细胞有什么危害?
A: 支原体污染后,不会使细胞死亡可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞收到多方面潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等,以致影响实验数据的可信度。

Q2: 支原体污染有什么特征?
A: 细胞状态变差,生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡。

Q3: 细胞通过何种途径感染支原体?
A: 支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(某些支原体在人体是正常菌群如口腔中的支原体)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验 器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染等等,由于支原体大小为 0.1~0.8 um,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um),血清中也可能含有支原体。

Q4: 细胞培养时,显微镜下的小黑点是什么?
A:支原体污染后,细胞凋亡坏死,释放出大量碎片,看起来就像小黑虫子。

Q5: 支原体污染如何检测?
A: 利用支原体具特殊专一性之primers,经由PCR反应来复制支原体DNA。所用primers来自支原体的conserved 16S-23S rRNA序列,由于此段序列依支原体种类不同而不同,因此可依所复制之DNA大小及其restriction fragment大小差异来作侦测与鉴定支原体。

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注:400bp左右处是支原体特异性条带,检测出则说明细胞被支原体污染。上图为常见8种支原体16s rRNA条带。

支原体污染特征:出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡关于支原体的检测方法,各大公司推出相关的试剂盒,价格高低不等。在欧洲药典的2.6.2章节,明确将PCR的检测作为其标准的检测方法之一。

Q6: 如何清除支原体?
A: 由于市场同类产品都为抗生素类,对细胞本身也会产生一定影响,而且有反复发作的风险,一些公司推出的产品MycoplasmaOUT?,活性成分为抗菌肽,经 多方测试表明对大部分细胞无毒害作用,因其独特的作用原理,支原体不会对其产生耐药性,并且其作用时间短,在三天内就可杀灭支原体,并自动降解成氨基酸, 不会对细胞造成二次污染。

Q7: 为什么在培养细胞前要加入 ?
A:由于支原体污染后能够进入细胞,而 不能够进入细胞内也就不能杀灭已经进入细胞的支原体,而这部分细胞死亡时会释放其内部的支原体,需要 来杀灭新释放出的支原体,以防止新生细胞受到污染。

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