英格恩技术博客 专注转染等实验

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免疫共沉淀经验总结分享

免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …

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免疫共沉淀实验原理及注意事项

一 、原理: IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A“特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。 二、实验最需要注意点 1 …

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免疫共沉淀超详细操作步骤

一、准备工作 预冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机 二、操作步骤 用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS; 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶,0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶) 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下, …

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