英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
一般来说，方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，将脉冲长度减半，电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件，可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。对于engreen的Entranster-E …
阅读更多 »电转感受态细胞的制备
1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB 固体平板上划单菌落； 2、次晨，挑选单克隆感至内含1ml SOB 液体培养基的试管中，37℃，300rpm，6 hr； 3、然后转接到含400ml SOB 液体培养基的2L 摇瓶中（按1:500 的量转接），300rpm，4hr，然后每隔2 min 测一次OD ，至OD =0.76； 4、立刻置冰水浴中骤冷，可以选择在一 …
阅读更多 »电转染后细胞孵育时间是多少？
每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染，最佳孵育时间一般为12-48小时，具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息，请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation
阅读更多 »电转染试剂对比
由此可见，在转染各类细胞系时，Entranster－E具有明显的优势，是一款比较理想的电转染试剂。
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内 …
阅读更多 »电转染实验时，siRNA有什么要求？
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列，以验证实验siRNA的特异性。同时也验证，针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
阅读更多 »电转染实验影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以 …
阅读更多 »电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备
一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶（容量为1或2L） 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl 0.5g 去离子水 950ml 250mmol/L KCl溶液 10ml 以5N …
阅读更多 »电转染实验过程中易出现的问题
不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …
阅读更多 »细胞电转染实验注意事项
选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …
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