2026年 1 月 30日, 星期五
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测序正确是不是说明shRNA构建没有问题

测序正确是一个重要的验证步骤,但它不能完全说明shRNA构建没有问题。下面我会具体说明为什么。 测序正确说明了什么? shRNA序列(包括发夹结构、目标序列)与设计一致: 如果你对构建后的质粒进行了Sanger测序,序列结果和你设计的shRNA完全一致,这说明你的克隆步骤(连接、转化等)是成功的。这意味着你至少在DNA水平上构建了正确的序列结构。 但这并不代 …

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体内转染与环状非编码RNA减少基因脱靶效应研究

环状RNA在许多生物系统中被发现。它们大多被认为是microRNA的分子“海绵”,具有许多未知的生物学活性。小干扰RNA作为许多非编码RNA之一,已成为基因表达调控和药物治疗的重要工具。虽然由siRNA介导的靶mRNA裂解具有高度的序列特异性,意外“脱靶”沉默内源基因在细胞中也观察到,这限制了siRNA的进一步应用。脱靶效应的siRNA也能诱导多种细胞凋亡。 …

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siRNA转染与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究

      L929成纤维细胞瘤细胞(l929-a)和L929纤维肉瘤细胞(l929-n)是不同的细胞系,常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α(TNFα)的研究,TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而,当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时,l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死,在l929-a中却不是 …

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RNA转染(Entranster)与髓源性抑制细胞的抑制潜能研究

       髓系来源的抑制性细胞(MDSC)介导了广泛而深刻的免疫抑制,特别是对T细胞功能的影响。在小鼠中,MDSC的特征是细胞表面分子Gr1(包括巨噬细胞和中性粒细胞标志物Ly6C和Ly6G)和CD11b的表达;在人类中,MDSC通常是CD11b+CD33+HLA-DR2。小鼠CD11b+Gr1+细胞群由两个亚群组 …

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动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法

一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中, 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液,此法非常简单,但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液,要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外,即以腮腺导管为中心,切成一直径约2~3cm的圆形粘膜片,将此粘膜片,与周围组织分开,穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …

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质粒DNA转染注意事项

1.启动子的选择启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。2.质粒的大小和质量线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒 …

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RNA转染与MDSC细胞和原发性干燥综合征研究

原发性干燥综合征(PSS)是一种全身性自身免疫性疾病。以外分泌腺的淋巴细胞浸润为特征的,主要是唾液腺和泪腺,导致分泌功能的丧失。虽然PSS的病因仍不清楚,但许多研究已经证实树突状细胞(DCS)、NK细胞、B细胞和T细胞参与了SS的发病机制。最近的研究发现,Th1和Th17免疫应答在PSS的发展中起着关键性的作用。髓系来源的抑制性细胞(MDSC)是具有免疫抑制 …

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RNA转染(entranster)后沉默现象不明显怎么办?

可能原因: 1. RNA与转染试剂比例不佳。可进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳。 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。 3. RNA效率不高。选择最优RNA,并采用已知高效的RNA做对照。 4. RNA酶污染。建议无RNA酶和内毒素的吸头、离心管和溶液等材料和实验器具。 5. 转染后培养时间不够。在mRNA水平可以到48 小时以后验证结果,在蛋白水 …

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体内转染与linc-smad7促进成肌细胞分化和肌肉再生研究

      骨骼肌来源于胚胎发育过程中的体细胞,这是一个高度协调的过程,涉及到成肌细胞增殖、分化的各个发育阶段,最终融合成多核肌管和肌纤维。这些发育阶段主要是由一系列肌源性调节因子(mrfs)确定,包括肌源性D、肌源性因子5(myf5)、肌生成素和mrf4,以及肌细胞增强因子2(mef2)家族。之前的研究表明,LncRNAs在表观遗传动力学和基因表达方面具有 …

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