英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
文献标题 Genomic Insights into the Origin, High Fecundity and Environmental Adaptation of Hu Sheep （湖羊起源、高繁殖力和环境适应性的基因组学研究） 发表期刊与影响因子 期刊名称：Advanced Science 影响因子：15.1（根据2025年JCR数据） 一、文献 …
阅读更多 »慢病毒感染细胞后，细胞长满48小时是否可以先传代，再等到72小时再喷霉素筛选吗
通常在进行慢病毒感染后，建议遵循以下操作步骤： 感染后观察细胞状态：感染后一般在48-72小时内可以看到较为明显的表达，但是否开始筛选需要看细胞的状态和感染效率。如果细胞长满了，可以考虑先进行传代，以避免细胞过度拥挤影响生长和感染效果。 喷霉素筛选的时机：喷霉素通常在感染后48-72小时开始筛选，但实际开始筛选的时间取决于感染效率和细胞状态。如果细胞感染后状 …
阅读更多 »已经把miRNA转染到了SW480细胞中，用来抑制RUNX1的表达，从而抑制细胞行为。已经通过WB验证了转染三天后RUNX1受到了抑制。现在的问题是应该在转染三天后消化细胞再做划痕实验，还是先种板做划痕再进行转染。
我的建议： 通常来说，如果你想研究miRNA对划痕愈合（细胞迁移）的影响，建议先进行miRNA转染，等待足够的时间让miRNA发挥作用（你提到的是三天），然后再进行划痕实验。这可以确保在进行划痕实验时，RUNX1已经被下调，迁移实验所观察到的结果是由RUNX1抑制所导致的。 但如果你担心转染后细胞的粘附性不好或者转染效率不高，也可以先进行划痕实验，让细胞在板 …
阅读更多 »电转染实验时，siRNA有什么要求？
使用Entranster-E试剂进行电转染实验时，要求使用纯度高、无菌且序列正确的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。尝试在250-750nM最终浓度范围内的siRNA浓度。Engreen建议导入一个非靶向或无意义的siRNA控制序列，以验证siRNA的基因特异性。此外，针对具有多个siRNA序列的基因可确保产生的表型不是由于脱靶效应所致 …
阅读更多 »如何在原核细胞中表达外源基因?
基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。基因重组的目的是使目的基因的某一细胞中能得到高效表达，即产生人们说需要的高产目的的基因产物，如蛋白质、多肽内生物药物。 基因表达是指结构基因在调控序列的作用下转录成mRNA，经加工后在核糖体的协助下有转译出相应的基因产物——蛋白质，再在受体细胞环境中经修饰而显示出 …
阅读更多 »细胞转染实验为什么不能加血清？
传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入 …
阅读更多 »双质粒共转染哺乳动物细胞，出现其中一个质粒表达量降低，而另一个质粒表达正常的情况，原因和解决办法
可能的原因： 质粒竞争效应： 在共转染过程中，两个质粒可能在转染效率、复制能力或表达资源（如转录因子和核糖体）上竞争。一个质粒可能因此受到抑制，导致其表达量下降。 解决方法： 提高低表达质粒的比例，例如2:1或更高。 尝试使用等摩尔浓度（而非等质量浓度）的质粒来转染。 质粒质量或纯度差异： 低表达质粒可能存在降解、污染或纯化不完全的问题，从而影响其转染效率或 …
阅读更多 »电转染试剂（Entranster-E）转染Huh7细胞效果图
RNA细胞转染实验影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »细胞转染实验的建议
1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×10^6-4×10^6细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 …
阅读更多 »