细胞培养

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂， 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基， 37’C 预热 培养瓶 装有70 ％乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …

在筛选 shRNA 细胞系后，如果你发现 RNA没有变化，但 蛋白水平减少，可能有多种原因。这里有一些可能的解释： 1. 转录后调控（Post-transcriptional regulation） miRNA或其他RNA调控：尽管shRNA能够靶向mRNA并降解其转录产物，细胞内可能存在 miRNA 或其他转录后调控机制（如RNA结合蛋白）影响 mRNA …

非常专业的问题！我来详细解答一下 嘌呤霉素筛选（puromycin selection） 的正确操作流程和原理，帮助你获得高效、稳定的筛选结果。 嘌呤霉素持续筛选时：培养基更换原则 嘌呤霉素筛选是为了筛出成功整合（或表达）抗性基因的细胞，通常建议： 每天或隔天更换含嘌呤霉素的新鲜培养基。 原因： 嘌呤霉素在培养基中会逐渐失效（降解或被细胞吸收），尤其在高细胞 …

随着各型肝炎、肝硬化、肝癌等慢性肝病的发病率日益升高，体外培养的肝细胞也被广泛地用千肝病基础研究中。尽管细胞培养技术不断改进和成熟，国内外也先后建立了多株人肝癌细胞系，但体外分离和培养人正常肝细胞仍是非常有价值的研究材料。 （一）材料与设备 1. 设备与器材   超净工作台、离心机、CO2 培养箱、－70℃ 冰箱、－20℃冰箱。2. 无菌材料   大培养皿、 …

目前，人们普遍认可单一类型细胞的最合乎生理的培养基是添加了蛋白质的、并且含有适当浓度的各种成分以及细胞外基质组分的限定培养基。 材料 基础营养培养基，如DMEM 营养物质：无机盐，氨基酸，维生素 微量元素 添加剂：生长因子和激素，其他各种培养基成分（见表1)  凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基，减少未限定培养基成分的浓度，直至细胞增殖能力降低，但活力 …

  alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal  β－半乳糖苷酶 Bis  N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …

大多数实验室使用抗生素，但是如果无菌操作技术掌握得很好，抗生素其实也不是必需的。多数抗生素在37°C 时的半衰期都很短，培养基内实际的抗生素浓度要比你以为的低。 细胞培养所用的抗生素通常以干粉形式保存，使用前用无菌水或其他溶剂将其溶解，得到的抗生素溶液可以不需要再进行过滤除菌。 细胞培养的两种标准抗生素 庆大霉素，储存液浓度5-10 mg/ml, 工作浓度为 …

下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10 ~ 13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 胚胎的分离 适用哺乳动物（仓鼠、小鼠和大鼠） 采用认可的方案处死啮齿动物 立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。若可能，置紫外灯下照射5分钟 用无齿的摄子和剪子在前腿下作一腹部水平切 …

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法，也没有观察到病变但是实验总是不成功 …

从新生大鼠的骨骼肌中分离成肌细胞（卫星细胞），在体外培养条件下，成肌细胞在培养底物上增殖，在诱导分化条件下，可迁移成直线排列，最终融合形成多细胞肌管。已有报道，将自体的骨骼肌细胞移植入心肌梗死后的瘢痕可改善心肌功能。这些进展激发了科研人员对体外成肌细胞增殖、分化分子机制的基础研究。下面将介绍新生大鼠骨骼肌细胞的原代培养及肌管诱导分化。该方法也可用于小鼠、兔、 …