英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
贮存液a 工作浓度 抗生素 浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒 氨苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20℃ 20μg/ml 60μg/ml 羧苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20℃ 20μg/ml 60μg/ml 氯霉素 34mg/ml(溶于乙醇) -20℃ 25μg/ml 170μg/ml 卡那霉素 10mg/ml(溶于水) -20℃ 10μ …
阅读更多 »抗体的使用以及储存方式
一、什么是抗体 抗体是一些淋巴细胞直接抵抗外来分子所产生的蛋白质，它们是免疫系统的重要组成成分，是实验室的重要工具。 多克隆抗体是用抗原注射动物产生的，针对相同蛋白质的不同抗原决定簇直接产生的各种不同亲和性的多种免疫球蛋白的混合物。 单克隆抗体是在体外制备的，是免疫淋巴瘤细胞与分泌抗体的浆细胞融合后产生的，整个培养只产生一种抗体（常是IgG) ，直接抵抗外来 …
阅读更多 »Trizol法提取总RNA的原理及注意事项
原理：Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。在样品裂解或匀浆过程中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的形式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能析出有机层的 …
阅读更多 »PCR、RT-PCR、qRT-PCR实验精髓
PCR PCR是很多科研者进入实验室做的第一个分子实验，名字听起来很高级，其实操作起来流程还是比较清晰明了，容易上手。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction），简称PCR，用于放大特定的DNA片段，也可看作生物体外的特殊DNA复制。其中使用的Taq酶是1976年从温泉中的细菌分离出来的。它的特性在于能耐高温，是一个很理想的酶。PC …
阅读更多 »2024年诺贝尔化学奖之计算蛋白质设计
计算蛋白质设计（Computational Protein Design）是一种利用计算机算法来设计具有特定功能和结构的蛋白质分子的方法。该领域的目标是通过计算预测蛋白质的结构与功能关系，以设计出符合特定需求的全新蛋白质或优化已有蛋白质，应用广泛于药物开发、酶工程、生物材料等领域。 计算蛋白质设计的核心步骤 确定设计目标：首先明确蛋白质设计的目标，例如设计具 …
阅读更多 »慢病毒感染，胶体金测出来很高，可感染效果很差的原因
慢病毒感染效率低，尽管用胶体金测试显示滴度很高，可能有以下几个原因： 病毒颗粒质量：虽然胶体金检测显示病毒滴度很高，但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损，无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异：胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量，但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒（感染性单位）可能比实际检测的数量要低 …
阅读更多 »南京中医药大学：忍冬苷靶向EZH2减轻溃疡性结肠炎通过自噬介导NLRP3炎性体失活
结肠巨噬细胞内NLRP3炎症小体的异常激活与溃疡性结肠炎的发生发展密切相关。虽然靶向NLRP3炎症小体被认为是一种潜在的治疗方法，但其调节肠道炎症的潜在机制仍存在争议。 2021年3月9日，发表于Acta Pharmaceutica Sinica B（影响因子11.413）的一篇题为Lonicerin targets EZH2 toalleviate ulc …
阅读更多 »碱－SDS 质粒小量制备
小量制备可以从细菌培养物中抽提和分析，离心机12 或16 管足够一次制备。 一、材料 5 ml 过夜培养细菌培养物。使用LB培养基加入合适的抗生素培养单克隆菌体，37’C 振荡培养 灭菌的微桩离心管 冰 溶液I （裂解缓冲液， 25 mmol/L Tr的HCI pH8.0, 50 mmol/L葡萄糖， 10 mmol/LEDTA) ，冰上预冷 溶 …
阅读更多 »动物基因组DNA的提取
实验原理 在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于构建基因组文库和 Southern分析。 通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。 仪器、材料与试剂 (一)仪器 1 . 台式离心机 2 …
阅读更多 »SDS-PAGE蛋白质样品的制备
将收集的各样品加入等体积的2×SDS-PAGE Loading Buffer，煮沸裂解5min，冰浴2min，12,000rpm离心10min，取上清-20℃保存备用。 SDS-PAGE蛋白质电泳 1）按照电泳装置的使用说明，装好洁净干燥的玻璃板。 2）分离胶的制备 按下列成分配制10mL 12%分离胶： ddH2O 30%丙烯酰胺混合液 1.5M Tris …
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