细胞生物学

此种方法最为可靠且成本低廉， 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。 （一）材料与设备 1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制， 高压除菌（加20％胎牛血清）。2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。 （ …

       siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …

1.DEAE-葡聚糖。这是早在1965年出现的转染方法。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子，使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克，也可能是细胞内吞作用使得DNA复合体进入细胞。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染，可重复性好，转染时要除掉血清。 2.磷酸钙共沉淀转染。最早在1973年 …

      CCAA试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是基于PI 染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒。 下面以engreen的CCAA试剂盒为例，说明一下检测方法。 1.收集并调整细胞浓度为1×106/ml，取1ml单细胞 …

成纤维细胞作为体外最易培养成功的正常细胞，用途广泛。但由于其有限的传代寿命，通常用于细胞衰老的研究，在肿瘤研究中，常常作为正常细胞对照，用于研究细胞恶性转化的条件和影响因素。另外， 它也常用于药物毒性的检测。体外培养的成纤维细胞， 还用于疾病的诊断，如染色体异常疾病的筛选、先天性代谢遗传疾病的细胞化学及生物化学检验和鉴定。 （一）材料与设备 1.设备   超 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

根据描述，您的shRNA已经成功将转录水平（mRNA水平）敲低了90%，但蛋白水平却没有显著变化。这种情况在RNA干扰实验中并不罕见，可能由以下原因导致： 可能原因分析 蛋白半衰期较长： 有些蛋白具有较长的半衰期，即使mRNA水平显著下降，蛋白水平可能仍然稳定。这是因为已有的蛋白质分子不会立即降解，需要更长时间才能逐渐减少。 翻译后调控： 某些蛋白质可能受翻 …

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μ …

首先siRNA由于只有二十几个碱基对，相比DNA几千上万对碱基，小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA，而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。其次，siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果，这对于过量表达的DNA转染来 …

细胞培养后转染时，细胞的密度和分布对转染效果有很大影响。如果你观察到中间密度较高，而边缘较稀，可能会对转染效果产生一定的影响，具体情况取决于以下几个因素： 细胞密度： 理想的转染效果通常在细胞处于对数生长期时最好，这时候细胞分裂活跃，且增殖速度较快。细胞密度过低（例如在培养皿的边缘区域）时，细胞之间的接触较少，转染效率通常会较差。相反，密度过高时（例如培养皿 …