细胞生物学

RNA转染时细胞毒性大可能的原因有： 1.RNA与转染试剂比例不佳。建议进行预实验优化。 2.细胞密度不佳。调整细胞密度。 3.细胞污染。建议彻底清洁所有细胞培养相关用品。 4.转染试剂毒性较大。建议选择毒性较小的非脂质体转染试剂，如纳米材料的Entranster试剂等。

1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …

实验准备 目标细胞：选择适合慢病毒感染的细胞株（如 HEK293T 或靶细胞）。 病毒稀释：对病毒原液进行一系列梯度稀释（如 10−1，10−2，10−3，10−4）。 感染细胞：将稀释后的病毒感染到目标细胞中，确保设置对照组（未加病毒）。 培养：培养 48-72 小时（根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整）。 检测方法：检测报告基因表达水平（如荧光蛋白 …

可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …

1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细胞污染 细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀：将提完质粒后或者提的最后一步 …

已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …

文献标题：SARDH in the 1-C metabolism sculpts the T-cell fate and serves as a potential cancer therapeutic target 期刊：Cellular & Molecular Immunology 影响因子：21.8 概要：本研究通过泛癌单细胞转录组分析，发现线 …

PBMC细胞（外周血单个核细胞）可以通过电转染（electroporation）进行基因转染。然而，由于PBMC细胞包括T细胞、B细胞、单核细胞和NK细胞等多种类型，且这些细胞对电转染的敏感性和效率存在差异，电转染PBMC细胞需要特定的优化。 一些关键的注意事项包括： 电转染参数：PBMC电转染的参数（如电压、脉冲时间和次数）需要根据细胞类型进行优化。通常， …

EB 病毒的特性之一是能使人外周血B 淋巴细胞转化，使其成为连续分裂，永久生存的类淋巴母细胞样细胞，即永生化细胞。每一永生细胞株都保存了原来提供血样个体的完整基因组，为研究世界上不同人种、不同民族的遗传结构，不同个体、不同人群对疾病的易感性，特别是对家族性遗传疾病和地方性疾病的易感性，提供了宝贵的遗传资源。 （一）材料与设备 1. 无菌材料   细胞培养瓶T …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …