细胞生物学

siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …

问：siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？ 答：siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问：哪种转染试剂效果好？ …

进行体外哺乳动物的细胞培养，其要点之一是在培养器皿中营造一种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH 和适当的渗透压。此外，培养的外环境，尤其隔水式CO2培养箱，一定要达到稳定的温度和湿度，以防培养液蒸发，还要供给呼吸所需的O2 和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系统的CO2 。目前普遍使用的培养基一般由两部 …

材料 装在冷冻培养瓶中的HeLa S3 细胞 70%（VIV) 乙醇 完全MEM-10 培养基， 37°C 胰蛋白酶／EDTA, 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V)EDTA, 37°C 转瓶完全培养基－5, 37°C 25 cm2 组织培养瓶 湿润的、37°C 、5%CO2 培养箱 Sorvall H-6000A 转头（或相当的）和 …

慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释： 慢病毒包装质量问题： 病毒滴度较低，导致感染效率不高，可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体，影响敲降效果。 靶向序列设计问题： shRNA或sgRNA设计不合理，没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应，影响敲降效果。 感染条件不佳 …

DEAE －葡聚糖介导的转染与磷酸钙共沉淀介导的转染在三个方面有重要的不同。第一，该方法用于克隆基因的瞬时表达，而不是细胞的稳定转化(Gluzman 1981 ) 。第二，该方法对BSC-1 、CV- 1 和COS 等细胞系非常有效，但对许多其他类型的细胞转染效果不理想。第三， DEAE－葡聚糖转染的DNA 用量比磷酸钙共沉淀转染少。采用0.1 ~ 1.0μ …

要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1.   选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内 …

选择适合哺乳动物细胞的高效表达载体时，通常需要考虑以下几个关键因素： 1. 目标蛋白的特性 蛋白大小和复杂性：如果你的目标蛋白比较大或具有复杂的后期修饰（如糖基化、磷酸化等），你需要确保载体能支持这些修饰。哺乳动物细胞通常用于表达这种需要后修饰的蛋白。 表达水平：有些载体可以提高蛋白表达的水平。你可以根据实验需要选择一个具有高表达效率的载体。 2. 选择合适 …

1．选择合适的转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …

细胞密度确实会影响转染效率和蛋白表达。如果细胞密度过高，可能会导致以下问题： 营养和废物积累：高密度会导致培养基中的营养迅速消耗，废物积累增加，这会影响细胞的健康状态，进而影响蛋白表达。 转染效率降低：高密度时，转染试剂和DNA更难均匀分布，影响转染效率。 蛋白表达影响：过度拥挤的细胞状态可能导致蛋白表达效率下降，甚至可能出现表达异常。 建议： 调整转染密度 …