英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
你遇到的这个问题在慢病毒（lentivirus）介导的RNA干扰实验中其实挺常见，下面我们逐步分析下可能的原因： 实验现象简述： siRNA转染敲得很有效（蛋白水平明显降低）； **将siRNA序列构建进慢病毒（shRNA形式）**后感染细胞； 荧光表达很强（说明病毒成功进入细胞，且有表达）； 但目标蛋白并未敲低，几乎没有 knockdown 效果。 可能原 …
阅读更多 »是否有嘌呤霉素筛选标记的病毒的病毒滴定protocol，看了好多好多不一样的?这个有比较权威又大众的滴度操作流程吗？
关于使用嘌呤霉素筛选标记（puromycin resistance marker）的慢病毒（lentivirus）或逆转录病毒（retrovirus）进行病毒滴定（virus titration）的 protocol，确实有不少不同的做法，这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是，有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考，下面是整理的一个 …
阅读更多 »怎么根据病毒的TCID50计算给毒的MOI值
根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI（Multiplicity of Infection，感染倍数）通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述： 知道病毒的TCID50值：TCID50 是一种病毒活性的度量，表示每单位体积（通常为每毫升）病毒悬液中，能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …
阅读更多 »慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔的作用?
在慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔主要有以下几个作用： 提高实验数据的可靠性由于生物实验存在一定的随机误差，复孔可以减少实验数据的偶然性，提高测量的准确性和重复性。 计算平均值，减少误差即使计算滴度时可能未直接用到每个复孔的数据，而是取某个稀释度下的阳性孔（如GFP阳性细胞数或抗生素筛选存活细胞数），但通常会计算复孔的平均值，以降低误差。 观察实验一 …
阅读更多 »如何解决病毒感染细胞效率低的难题？
病毒感染细胞本来效率就较低，一定要注意以下几点：1.感染时的培养基尽量少些；2. 使用Envirus-LV，可以提高效率约20-50倍。 病毒感染细胞本来效率就较低，整个过程相对复杂难操作，一般一次花费周期至少两三个月，多则几个月到十几个月不等，经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染 …
阅读更多 »PD-1沉默对CAR-T细胞影响研究
文献标题 PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity 影响因子 8.676（Journal for ImmunoTherapy of Cance …
阅读更多 »请问那乳胶法能测出失活病毒么
乳胶法（Latex agglutination test）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法，通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒，这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合，形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”（即病毒的活性丧失），但其结 …
阅读更多 »慢病毒感染后多长时间换液和多长时间检测?
在慢病毒感染的实验中，通常的做法是，在感染后24小时更换培养液，目的是去除未吸附的病毒和残留的病毒介质，避免对细胞的毒性影响。更换培养液后，细胞会继续培养，通常会保持培养在常规的全培液中。 对于延长观察时间的问题，感染后72小时一般是观察慢病毒感染效果的一个标准时间点，因为大多数慢病毒的转导效率在72小时内达到峰值。尽管感染后24小时更换培养液，但并不意味着 …
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