英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
乳胶法（Latex agglutination test）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法，通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒，这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合，形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”（即病毒的活性丧失），但其结 …
阅读更多 »慢病毒感染后，细胞不生长原因？
慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。 以下是一些常见的原因和解决方法： 1) 病毒滴度过高: 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 2) 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染 …
阅读更多 »在比较慢病毒和正常病毒（阳性对照）时，如何合理调整 MOI 值，使其具有可比性?
慢病毒滴度较低，通常需要较高的 MOI（如 20）才能有效感染，而正常病毒滴度较高，合适的 MOI 可能为 0.1。要将两者放在一起进行比较，可能需要考虑以下因素： 实验目的： 如果关注的是相同数量的感染细胞，可以根据感染效率调整 MOI，以保证相似的感染率。 如果关注的是病毒自身的感染特性，可能需要分别选择最佳 MOI 进行单独实验，再综合分析。 病毒载量 …
阅读更多 »AAV病毒-细胞外RNAs-TLR3信号通路认知障碍研究 （IF:39.3）
文献标题：Extracellular RNAs-TLR3 signaling contributes to cognitive impairment after chronic neuropathic pain in mice 影响因子：Signal Transduction and Targeted Therapy 是Nature旗下期刊，2023年影响因 …
阅读更多 »AAV病毒感染，tu/ml和vg/ml 的单位如何 换算
在AAV病毒感染实验中，TU/mL（转导单位每毫升，Transduction Unit per milliliter）和vg/mL（病毒基因组拷贝数每毫升，Viral Genome copy per milliliter）是两种常见的病毒滴度单位。它们表示的是病毒浓度的不同方面： TU/mL：代表的是真正具有转导能力的AAV颗粒的数量，也就是能够在宿主细胞中 …
阅读更多 »siRNA转染很有效（蛋白水平明显降低），将siRNA序列构建进慢病毒（shRNA形式）后感染细胞，荧光表达很强，但目标蛋白并未敲低，这是什么原因
你遇到的这个问题在慢病毒（lentivirus）介导的RNA干扰实验中其实挺常见，下面我们逐步分析下可能的原因： 实验现象简述： siRNA转染敲得很有效（蛋白水平明显降低）； **将siRNA序列构建进慢病毒（shRNA形式）**后感染细胞； 荧光表达很强（说明病毒成功进入细胞，且有表达）； 但目标蛋白并未敲低，几乎没有 knockdown 效果。 可能原 …
阅读更多 »是否有嘌呤霉素筛选标记的病毒的病毒滴定protocol，看了好多好多不一样的?这个有比较权威又大众的滴度操作流程吗？
关于使用嘌呤霉素筛选标记（puromycin resistance marker）的慢病毒（lentivirus）或逆转录病毒（retrovirus）进行病毒滴定（virus titration）的 protocol，确实有不少不同的做法，这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是，有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考，下面是整理的一个 …
阅读更多 »慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »逆转录病毒可以共感染吗？
可以。逆转录病毒（如MLV、lentivirus等）可以共感染同一细胞，尤其是不同病毒包装不同的转基因载体时，可以实现共转导（co-transduction），从而使同一细胞获得多个基因。 但要注意： 病毒滴度足够高：每个病毒的MOI（Multiplicity of Infection）需要合适，才有可能让同一细胞被两种病毒都感染。 标记或选择机制清晰：常用 …
阅读更多 »慢病毒倍比稀释测定活性的实验中，DAY2天时，把稀释好的病毒和细胞孵育过夜时，用把细胞原培养基吸取出去吗，还是直接把病毒液添加进去？
好问题！在进行 慢病毒倍比稀释测定病毒滴度（titer） 的时候，DAY2 加入病毒时是否更换培养基，确实是一个关键点，对感染效率有一定影响。下面是两种常见操作方式，以及推荐做法： 推荐操作：先吸掉培养基，再加病毒（常规做法） 流程简述（以DAY2为节点）： DAY1：铺板细胞（如293T、HEK293，常用于测滴度）； DAY2：感染操作 吸掉旧培养基； …
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