2024年 4月 29日, 星期一
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电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备

一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶(容量为1或2L) 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨     20g 细菌培养用酵母提取物      5g NaCl                     0.5g 去离子水                 950ml 250mmol/L KCl溶液        10ml 以5N …

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Green先生的科研生活手记(1)

原创文章,转载请注明出处。 第一章 我的硕士课题竟然需要女友来拯救 生物硕士苦啊,2年多了。课题仍然停滞不前。 话说我是一枚研究大脑基因功能的小硕,具体研究的是大脑某神经相关基因的功能,这个基因的功能事关人的智力认知,研究好了,会造福人类,想想真是激动啊。 可想想我的研究,却一点也无法激动。实验卡住了,卡住了……,拯救愚蠢的人类不容易 …

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Green先生的科研生活手记(4)

原创文章,转载请注明出处。 孩童的无知无畏 苏格拉底说,“孩子在成人眼里是幼稚的,而成人在上帝眼里也是幼稚的”。 我想说,对生命科学的了解越多,我越觉得自己的浅薄无知,对生命也越敬畏。这也是我对生命科学研究爱恨交织的原因。 对大自然,或者生命,我们必须有非常敬畏的态度,生命不是稍纵即逝的感受,而是永恒的,虽然我们每个个体只能经历其中一小段。我们必须非常小心谨 …

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直接克隆法构建重组腺病毒基因组

pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒,,可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …

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RNA的种类

dsRNAdsRNA 即双链RNA , 是由两条互补链复性形成的RNA 分子,可以被Dicer 酶切割形成siRNA 。 Endo-siRNAEndo-siRNA 即内源性小干扰RNA (siRNA) ,是一类存在于几乎所有真核生物中的小干扰RNA 分子。 exo-siRNAexo-siRNA 即外源性小干扰RNA (siRNA) ,是指通过体内或者体外技术 …

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30个关于CCK-8的Q&A

Q1: 一个孔中应接种多少个细胞? A1: 当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。   Q2: 能否用3 …

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Green先生的科研生活手记(3)

巴赫与爱尔兰民谣 我戴上耳机,心情不好的时候,歌曲是我最好的,永远的朋友。我认为,唯有音乐如水晶般,没有半点瑕疵,代表人类最美好情感,最最纯净的东西, 尤其是无歌词的曲子。语言往往情感到极致,就只能大喊大叫。可曲子不用发多高的音,就能直击你的灵魂,作者住进了你心里的最底层,勾起的是你最核心,最隐秘的情感,你和他(她)能相对无语,却完全心灵相通,你能感知他(她 …

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Green先生的科研生活手记(2)

原创文章,转载请注明出处。 第二天,我兴冲冲地找到导师,告诉他有新的基因敲除的方法,还没等我说完,导师直接打断我, “你试了多少方法了,买了多少试剂了?这种方法,我怎么没有听说过?,不要瞎尝试了,你的时间不多了,看你毕不了业怎么办?! 我冷汗都下来了。 回想三年前,我从南方一所三本院校考上这所著名的研究所,面试时老师也是如此严厉,我也是冷汗直流。 话说我本科 …

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关于如何发表一篇高分论文,Nature期刊给出了这几点建议

写论文是在讲述一个故事 1.文章标题 (1)准确清晰,反映文章主题 2.研究背景 (1)说明为什么这是一个令人兴奋的问题,为什么这对我们的领域很重要以及你的工作将如何帮助回答这个问题,为一个激动人心的故事搭建好舞台。 (2)我是怎么想到这个问题的?为什么这很重要?这就是基本的介绍。现在我将带领你们看看我是如何回答它的,这就是我们的方法和结果。 (3)最后我会 …

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